Wir stellen ein detailliertes Protokoll für einen Drosophila melanogaster-Assay zur Nahrungssuche zur Verfügung. Wir besprechen die Vorbereitung und Handhabung von Versuchstieren, die Durchführung des Assays und die Analyse der Daten.
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In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Drosophila melanogaster Larven Weglängen-Phänotyp ist ein etabliertes Maß verwendet , um die genetischen und Umwelt Beiträge zur Verhaltensänderung zu studieren. Die Larven Weglängen-Assay wurde individuelle Unterschiede in der Nahrungssuchverhalten zu messen entwickelt , die später auf die Nahrungssuche Gen verknüpft wurden. Larval Pfad-Länge ist ein leicht erzielte Merkmal, das die Sammlung von großen Probengrößen bei minimalen Kosten, für die genetische Bildschirme erleichtert. Hier bieten wir eine detaillierte Beschreibung des aktuellen Protokolls für die Larven- Weglänge Assay zuerst von Sokolowski verwendet. Das Protokoll beschreibt, wie reproduzierbar Testtiere behandeln, die Verhaltenstest durchführen und die Daten zu analysieren. Ein Beispiel, wie kann der Assay verwendet werden Verhaltensplastizität in Reaktion auf Umweltveränderungen zu messen, die von Umgebungs Manipulieren Einspeisen vor dem Test durchgeführt wird, ist ebenfalls vorgesehen. Schließlich entsprechende Test-Design sowie Umweltfaktoren, die ändern könnenLarven Weg Länge wie Lebensmittelqualität, sind Entwicklungsalter und Tag Effekte diskutiert.
Einleitung
Seit der Entdeckung des weißen Gens in Thomas Hunt Morgan Labor im Jahre 1910, die Fruchtfliege, Drosophila melanogaster (D. melanogaster), wurde als Modell für die Untersuchung der molekularen und physiologischen Grundlagen der verschiedenen biologischen Prozessen eingesetzt. Die Popularität von D. melanogaster resultiert im Wesentlichen aus der großen Menge und Vielfalt an genetischen Werkzeugen. Drosophila geringe Größe, relativ einfache Handhabung und kurze Generationszeit machen es zu einem idealen Modell für Genetik Studien. Ebenso wichtig ist die Fähigkeit der Drosophila viele der Phänotypen von ko....
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Protokoll
1. Bereiten Sie Trauben Platten und Halten Flaschen für Sammlung von Larvae
- Um halten Flaschen machen, schneiden Löcher in einer Seite von 6 Unzen Fliegenkulturflaschen, groß genug , um eine Fliege Fläschchen Stecker für die Luftzufuhr zu passen (Abb. 1D).
- Um Trauben Platten machen, bereiten 250 ml Traubensaft Medium (1,8% Agar, 45% Traubensaft, 2,5% Essigsäure, 2,5% Ethanol) durch Kochen des Agar, Traubensaft und das meiste Wasser, abkühlen auf 70 ° C ( rühren, während) Abkühlen, dann Essigsäure und Ethanol hinzufügen und auf das Volumen mit Wasser bringen.
- Verwenden , um eine Spritze (ohne Kanüle) zu füllen , 35 x 10 ....
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Ergebnisse
Unterschiede in der Pfadlänge des Rover und Sitter für die Stämme und die Wirkung von Nahrungsentzug auf dem Weg Länge sind in Fig. . 3 gesammelten Daten über drei aufeinander folgenden Testtagen zeigten eine signifikante Belastung Effekt (F (1,421) = 351,89, p <2,20 x 10 -16; Fig . 3A), mit Rovern reisen weiter als Sitter. Zusätzlich zu der Verspannungseffekt gab es auch eine sign.......
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Diskussion
Die Pfadlänge Test hier skizzierte bietet eine robuste und einfache Maßnahme der Nahrungssuchverhalten von Drosophila - Larven. Das Protokoll folgt der allgemeinen Methodik in Sokolowski 2 beschrieben, jedoch wurde in Bezug auf Effizienz und experimentelle Kontrollen da verbessert. Nach bestem Wissen ist diese Methode die einzige verfügbare Methode zur Larven Pfad-Länge. Die ursprüngliche Version des Pfadlänge Protokoll 2, 3, 15, 16 getestet Larven auf Petrischalen mit einer dünnen Schicht.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Danksagungen
Die Autoren bestätigen die fortgesetzte Finanzierung der MBS durch den Natural Sciences and Engineering Council of Canada (NSERC).
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 6 Unzen; Flaschen für Fliegenkultur | Fisher Wissenschaftlich | AS355 | |
| Fliegenfläschchen Stopfen | Droso-Plugs | 59-201 | |
| 35 x 10 mm Petrischalen | Falcon | 351008 | |
| 100 x 15 mm Petrischalen | Fisher | 875712 | |
| 60 x 15 mm Petrischalen | VWR | 25384-168 | |
| Sonden zum Präparieren | Almedic | 2325-58-5300 | |
| Hefe Lab Scientific | FLY-8040-20F |
Referenzen
- Behavioral Genetics of the Fly (Drosophila melanogaster). Dubnau, J. , Cambridge University Press. New York. 173(2014).
- Sokolowski, M. B. Foraging strategies of Drosophila melanogaster: a chromosomal analysis. Behav Genet. 10, 291-302 (1980).
- de Belle, J. S., Hilliker, A. J., Sokolowski, M. B.
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Nachdrucke und Genehmigungen
