Ableitung von Leptomeningen Explantation Kulturen von Postmortem Human Brain Donors

Kelsey Lee; Ou Chong Saetern; Andrew Nguyen; Leonardo Rodriguez; Birgitt Schüle

doi:10.3791/55045

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Methodenartikel

Ableitung von Leptomeningen Explantation Kulturen von Postmortem Human Brain Donors

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DOI:

10.3791/55045

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21. Januar 2017

Kelsey Lee^*¹ , Ou Chong Saetern^*¹ , Andrew Nguyen¹ , Leonardo Rodriguez¹ , Birgitt Schüle¹

¹Parkinson’s Institute and Clinical Center

^* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Die Leptomeningen Explantatkultur Protokoll aus menschlichem post mortem Gehirn ist eine technisch robuste und einfache Art und Weise Fibronektin-positive meningeal Fibroblasten innerhalb von 6-8 Wochen und kryokonserviert werden etwa 20-30 Millionen Zellen abzuleiten.

Zusammenfassung

Obwohl große Fortschritte in der klinischen Charakterisierung der Parkinson-Krankheit, einige Studien durchgeführt worden, berichten, dass die Diagnose der Parkinson-Krankheit ist nicht pathologisch bis zu 25% der klinisch diagnostizierten Parkinson-Krankheit bestätigt. Daher ist aus klinisch diagnostizierten Patienten gesammelt Gewebe mit idiopathischen Parkinson-Krankheit eine hohe Rate von Fehldiagnose haben kann; daher in vitro Studien aus solchen Geweben Parkinson-Krankheit zu studieren , wie einem präklinischen Modell zwecklos werden kann.

Durch das Sammeln von postmortalen humanen Leptomeningen mit einer bestätigten neuropathologischen Diagnose der Parkinson-Krankheit und gekennzeichnet durch nigrostriatalen Zellverlust und die intrazelluläre Proteineinschlüsse genannt Lewy - Körperchen, kann man sicher sein , dass klinisch beobachtet Parkinsonismus nicht von einem anderen zugrundeliegenden Krankheitsprozess verursacht wird (zB Tumor, Arteriosklerose).

Dieses Protokoll presents die Präparation und Herstellung von postmortalen menschlichen Leptomeningen zur Ableitung eines meningeal Fibroblasten-Kultur. Dieses Verfahren ist robust und besitzt eine hohe Erfolgsquote. Die Herausforderung der Kultur liegt Sterilität als das Gehirn Beschaffungs allgemeinen nicht unter sterilen Bedingungen durchgeführt wird. Daher ist es wichtig, die Kulturmedien mit einem Cocktail aus Penicillin, Streptomycin und Amphotericin B. zu ergänzen

Die Ableitung der meningealen Fibroblasten von Autopsie bestätigten Fälle mit Parkinson-Krankheit ist die Grundlage für in vitro - Modellierung von Parkinson-Krankheit. Meningeale Fibroblasten erscheinen 3-9 Tage nach der Probenvorbereitung und etwa 20-30 Millionen Zellen können in 6-8 Wochen kryokonserviert werden. Die meningeal Fibroblasten-Kultur ist homogen und die Zellen exprimieren Fibronektin, eine häufig verwendete Marker Hirnhaut zu identifizieren.

Einleitung

Meninges bestehen aus drei Membranen, die das Gehirn zu schützen: Dura mater, Arachnoidea und Pia mater. In jüngerer Zeit wurde erkannt , dass Meningen eine wichtige Rolle auch in der Entwicklung des Gehirns und des Gehirns Homöostase ^1. Meningen aus mesenchymalen und Neuralleiste abgeleiteten Zellen abgeleitet und interessanterweise , es , dass Vorläuferzellen in Meningen wurden , können in verursachen Neuronen in vitro und vivo nach der Transplantation ^{^2,} ^{^3,} ⁴ wohnhaft gezeigt. Meningen Kulturen wurden auch erfolgreich als....