JoVE Journal > Bioengineering
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Ergebnisse
Discussion
Offenlegungen
Acknowledgements
Materials
Referenzen
Automatische Übersetzung
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Biotechnik

تعديل التقييم الأولى لجسم-يصرف مع الببتيدات المشتقة من الفيروسية لزيادة تراكم الخلوية وتحسين استهداف الورم

Published: March 08, 2018
doi:
10.3791/55440
, , , , , ,
1Department of Nuclear Medicine and Radiobiology,Université de Sherbrooke, 2Sherbrooke Molecular Imaging Center (CIMS),Université de Sherbrooke, 3Sherbrooke Institute of Pharmacology

Summary

الببتيدات المشتقة من الفيروسية بالإضافة إلى جسم-يصرف (ACs) نهج تكتسب زخما بسبب إمكانية إيصال حمولات الجزيئية مع تراكم خلايا الورم زيادة. استخدام أساليب مشتركة لتقييم تصريف الببتيد والتيار المتردد وتراكم حمولة داخل الخلايا، واستهداف الورم، هذا البروتوكول يساعد الباحثين خلال مراحل التطوير الأولية الرئيسية.

Abstract

جسم-يصرف (ACs) تعديل مع الببتيدات المشتقة من الفيروسات فئة قوية من ورم الخلية تسليم وكلاء لحمولات الجزيئية المستخدمة في علاج السرطان والتصوير بسبب زيادة تراكم الخلوية عبر الرابطة الحالية. خلال AC المبكر في المختبر تطوير تقنيات الأسفار والكلون تكفي لتحديد الترجمة داخل الخلايا، وكفاءة تراكم، وخصوصية الخلية المستهدفة. تجدر الإشارة إلى أن هناك حاليا، لا يوجد توافق في الآراء على أساليب موحدة لإعداد الخلايا لتقييم التراكم داخل الخلايا التيار المتردد والتعريب. الاختبار الأولى للرابطة تعديل مع الببتيدات المشتقة من الفيروسات أمر بالغ الأهمية خاصة إذا تم تشييد العديد من المرشحين. تحديد تراكم داخل الخلايا بالأسفار يمكن أن تتأثر بالإشارات الخلفية من ACs على سطح الخلية وتعقيد تفسير تراكم. الكلون، الخلايا المعالجة عادة هي مجزأ وقياس النشاط الإشعاعي في المقصورات خلية مختلفة. ومع ذلك، تحلل الخلية يختلف من خلية إلى خلية والمقصورات غالباً النووية وهيولي ليست معزولة على نحو كاف. وهذا يمكن أن تنتج بيانات مضللة عن خصائص تسليم الحمولة. الحقن الوريدي المستمدة من الفيروسات المعدلة الببتيد الرابطة راديولابيليد في ورم تحمل الفئران تليها النويدات المشعة التصوير وسيلة قوية لتحديد خصائص التسليم لاستهداف وحمولة الورم في المرحلة في فيفو من التنمية. ومع ذلك، هذا هو النهوض حديثة نسبيا والمجموعات القليلة التي قيمت ACs المستمدة من الفيروس بتعديل الببتيد بهذه الطريقة. يصف لنا تجهيز الخلايا المعالجة لتقييم أكثر دقة تعديل الببتيد AC تراكم المستمدة من الفيروسات عند استخدام الفحص المجهري [كنفوكل] والكلون. على وجه التحديد، طريقة للخلايا تريبسينيزينج لإزالة سطح الخلية ملزمة ACs. كما نقدم طريقة لتحسين وجود الهاتف الخلوي. وأخيراً، يوفر هذا البروتوكول أسلوب في فيفو استخدام التصوير المقطعي بالبوزيترون (PET) لتقييم الورم الأولى استهداف خصائص في الفئران الحاملة للورم. يمكننا استخدام النظائر المشعة 64Cu (t1/2 = ح 12.7) كحمولة مثال في هذا البروتوكول.

Introduction

جسم مضاد-يصرف (ACs) هي الأحيائية التي تنضج في فئة تحويلية من العقاقير الفعالة لتحسين علاج السرطان واكتشاف الأورام. يتألف من جسم [مونوكلونل] (ماب) مترافق لحمولات الجزيئية مثل النظائر المشعة، والجزيئات الصغيرة، والسموم البيولوجية، رابطة الدول الكاريبية قادرة على تسليم هذه الحمولات للخلايا السرطانية مع تقارب مستضد الهدف الرائع وخصوصية. وهكذا ACs لديها القدرة على تقليل سمية غير محدد إلى حد كبير وزيادة نشاط الحمولة في موقع الورم. علاجية، تمت الموافقة على ACs تنقل الجزيئات الصغيرة السامة للخلايا (يشار إليه كما يرتبط الضد-المخدرات) لعلاج المرضى المصابين بسرطان الثدي وسرطان الغدد اللمفاوية هودجكين الذين فشلت العلاجات التقليدية 1، 2-وبالإضافة إلى ذلك، النظائر المشعة نقل رابطة الدول الكاريبية (يشار إليه فيما يلي راديويمونوكونجوجاتيس) أيضا في التنمية. ميلان نقل النظائر المشعة لتصوير معتمد لتحديد سرطان البروستاتا ورم خبيث 3. مع العديد من الرابطة أكثر العلاجية المقدمة للموافقة على 4، مرتفع التفاؤل لمستقبل الرابطة لتحسين رعاية السرطان 5.

ومع ذلك، عند تقديم تشريعات أو النظائر المشعة، ACs يجدون صعوبة في فعالية تتراكم هذه الحمولات داخل الخلايا المستهدفة. هذا الجانب تسهم إلى حد كبير في كثير من الحالات في العجز الرابطة لتوفير البقاء فترة طويلة خالية من المرض أو الورم التباين العالي التصوير 6،7. بشكل عام، بمجرد ربط ACs على مستضد المستهدفة هي استيعابه من خلال عملية تعرف باسم الالتقام بوساطة مستقبلات. ACs ثم شرك داخل اندوسوميس والاتجار بهن إلى lysosomes للتدهور وحمولة الإصدار 8. هناك تحديات عملية الاتجار داخل الخلايا للرابطة لتحقيق خصوصية حمولة عالية وفعالية ضد الخلايا السرطانية المستهدفة. على سبيل المثال، العديد من المستضدات مثل Her2 (الهدف للتيار المتردد العلاجية تراستوزوماب-امتانسيني) يمكن إعادة تدوير يصل إلى 85% من الأجسام المضادة منضمة في ال 30 دقيقة الأولى 9. وعلاوة على ذلك، بمجرد حدوث تدهور تشريعات المفرج عنهم والنظائر المشعة يمكن بنشاط تصدير التعبير زيادة و/أو النشاط من غشاء المرتبطة النقل البروتينات 10،11. تدهور يحلول يعرقل أيضا تسليم الحمولات البيولوجية رواية مثل الإنزيمات العلاجية والنوكليوتيد التي يمكن إلغاء تنشيط 12،13. في جوهره، سرطان الخلية فعالة للغاية في نقض تراكم الحمولات التي تقدمها الرابطة الضرورية داخل الخلايا.

هذا البروتوكول وصف كيفية تطبيق مفهوم الرابطة-بالإضافة إلى الببتيدات المشتقة من الفيروس، على وجه التحديد للهروب من فخ دخلول وإضفاء الطابع المحلي على نواة الخلية. مع هذا التطور للتلاعب بنظم الخلية المضيفة، فإنه ليس من المستغرب أن تنمية الببتيدات والبروتينات المشتقة من الفيروس كصيدلية المحتملة طويلة لها جذور في الأبحاث العلاجية 14. لملايين السنين تطورت الفيروسات للحصول على مجموعة استثنائية من البروتينات قادرة على استغلال نظم خلية الثدييات فيزيولوجية طبيعية من أجل فعالية إدخال الخلايا المضيفة. للبحث عن الفيروسات التي يتم استيعابها عن طريق وساطة مستقبلات الالتقام، أنهم أيضا تحدي مع الإفلات من الاتجار إلى يحلول حيث يمكن أن تكون هجمة تركيز مترجمة من البروتياز إشكالية بالنسبة للبقاء على قيد الحياة. هو ببتيد الفيروسية مشتقة تتسم أيضا استخدامها في إيصال المخدرات للهروب من فخ دخلول ترانساكتيفاتور فيروس نقص المناعة البشرية من النسخ (تأت) البروتين 15. تأت غير قادرة على النجاة من فخ دخلول الاستشعار عن النقطة التي تحدث تغييرات conformational البروتين تأت مواتية لإدراج نفسها في وتعطيل غشاء اندوسومال 16على درجة الحموضة منخفضة. ينتج عن هذا يصرف تأت-حمولة قادرة على الوصول إلى السيتوبلازم. والعنصر الثاني التلاعب الفيروسية ذات الصلة بهذا البروتوكول هو النهج المستخدمة لتوصيل الجينات العلاجية والأدوية إلى نواة 17. وقد تطورت الفيروسات التلاعب بنجاح إليه الخلية المضيفة لتتقدم في الماضي الغشاء النووي التي تمر عبر المسام النووية المعقدة (مجلس الشعب). الجزيئات الخلوية تحتوي على (أو الربط بالبروتينات التي تحتوي على) إشارات التعريب النووية (نلس) اللازمة للربط النووية إلى نقل البروتينات (مثل كاريوفيرينس α و β)، التي توفر الحركات المطلوبة من خلال المجلس الوطني. وقد وضعت الفيروسات البروتينات تحتوي على تسلسلات NLS تزويدها بالقدرة على الاستفادة من البروتينات النقل الخلية المضيفة لجولات مكوكية إلى نواة 18.

سابقا تم فونكتيوناليزيد مع الببتيدات تأت NLS مشتقة-والرابطة العديدة واختبار لقدرتهم على تتراكم داخل الخلايا السرطانية واستهداف الأورام 19،،من2021،22 ،،من2324،25،26،27،28،،من2930 (الجدول 1). وقد أثبتت الدراسات تسليم الحمولات السامة للخلايا أن الرابطة تعديل مع الببتيدات المشتقة من الفيروسات تكون قادرة على زيادة تراكم الخلوية، وسيتوتوكسيسيتي، وورم مما أسفر عن مصرع على مدى 22،ACs غير معدلة26. سمة مشتركة لهذه الفئة الجديدة من التيار المتردد هو البناء. عادة، تحتوي على الببتيدات سيستين المحطة طرفية توفير مجموعة سلفهيدريل مجاناً. وكان رد فعل مابس هي أولاً مع كروسلينكير بيفونكشونال نونكليفابل التي تحتوي على N-هيدروكسيسوكسينيميدي (NHS) ومجموعات ماليميدي على طرفي نقيض. استرات دائرة الصحة الوطنية التي تتفاعل مع الأمينات الأولية في ماب شكل سندات أميد. ثم رد فعل ماب ريكتيد مع المجموعات ماليميدي الحرة مع مجموعات سلفهيدريل على الببتيدات تشكيل سندات ثيويستير وهكذا يربط بين الببتيد والإنسان والمحيط الحيوي. على الرغم من أن كروسلينكيرس هوموبيفونكشونال قد تستخدم 28، crosslinker هيتيروبيفونكشونال أكثر شيوعاً في تشييد المستمدة من الفيروسات الببتيد-ACs 22،،من2326، 31،32. يستخدم هذا البروتوكول تحديداً سولفوسوكسينيميديل كروسلينكير 4-(ن-ماليميدوميثيل) الحلقي-1-كاربوكسيلات (سالفو-بين الموظفين) لسهولة الاستخدام، ونظرا لاستخدامه في جسم المعتمدة-المخدرات المتقارنة تراستوزوماب-امتانسيني، وفي كثير من الببتيد-ACs المستمدة من الفيروسات 8،22،23،26،،من3132. الصوديوم دوديسيل كبريتات polyacrylamide هلام استشراد (الحزب الديمقراطي الصربي صفحة) هو الأسلوب الأساسي لتحديد كفاءة التصريف في البداية وشبه تحديد عدد الببتيدات للإنسان والمحيط الحيوي. [كنفوكل] مجهرية من جسم ثانوي المسمى فلوريسسينتلي محددة للإنسان والمحيط الحيوي استخدام أسلوباً عادة لتقييم خصائص التوزيع داخل الخلايا المستمدة من الفيروسات الرابطة تعديل الببتيد في البداية. وحتى الآن، هي النظائر المشعة حمولات الابتدائي ألقاه المستمدة من الفيروسات ACs تعديل الببتيد. النظائر المشعة مفيدة للنشاط الإشعاعي في الخلايا كمياً بسهولة عن طريق العد غاما. وبالإضافة إلى ذلك، توفر رابطة الدول الكاريبية التي يتم ترجمتها إلى نماذج الماوس من السرطانات البشرية الباحثين مع القدرة على تقييم استهداف الورم باستخدام طرائق التصوير الجزيئي مثل حسابها انبعاث فوتون واحد التصوير المقطعي والتصوير المقطعي بالبوزيترون (PET) 23 , 32 , 33-وبصفة عامة، البناء، والتحقق من صحة اختبار الأساليب المستخدمة في المقام الأول من قبل الباحثين تقديم تقييم جيدة جداً للرابطة تعديل مع الببتيدات المشتقة من الفيروسات أثناء مرحلة التطوير الأولى لفعالية إدخال وتسليم الحمولة داخل الخلايا المستهدفة، والأورام المستهدفة.

وقد تأت-NLS-تعديل ورابطة الدول الكاريبية مضيئة المجالات الرئيسية لزيادة تحسين إيصال حمولة داخل الخلايا السرطانية والأورام. فيما يتعلق بتعديل NLS ACs، الكفاءة في التراكم داخل الخلايا يمكن أن تكون متواضعة 23،،من3134. بسبب عدم كفاءة تراكم داخل الخلايا الفخ المتواصل اندوسومال. في فيفو استهداف الورم يمكن أيضا التقليل مع كلا تأت-NLS-تعديل ورابطة الدول الكاريبية. تسلسل النشطة التي تأت و NLS تحتوي على بقايا مشحونة بإيجابية عدة. عند إرفاق مابس، يمكن أن تكون التهمة الموجبة عموما إلى حد كبير زيادة 35. نتيجة لذلك، تأت-NLS-تعديل ورابطة الدول الكاريبية زادت الإقبال في الأنسجة السليمة وزيادة إزالة الدم السريع.

لدينا فريق تطوير مركب مركب يتكون من حمض الكوليك ترتبط NLS (تشاكنلس؛ الشكل 1). ACs بتعديل تشاكنلس قادرين على زيادة تراكم سلمت النظائر المشعة داخل الخلايا وتحسين استهداف الورم مقارنة بالتقليدية وتعديل NLS ACs 33،34. الآلية وراء حمض الكوليك مستوحاة من قدرة تحديد الفيروسات nonenveloped التي لا يمكن الاعتماد على غشاء الانصهار الاستفادة من حمض الكوليك لتحريك دخلول الهروب من خلال تشكيل السيراميد. على سبيل المثال، المجندين الفيروس المعوي الخنزير حمض الكوليك التي ينشط فيها سفينجوميليناسي، مما يحفز على أن التحلل سفينجوميلين إلى السيراميد 36،،من3738. وهذا يزعزع غشاء اندوسومال ويسمح للفيروسات الهروب. وهكذا، حمض الكوليك عنصرا آخر المستمدة من الفيروس الذي يكمل NLS.

هذا الحقل يتحرك إلى الأمام والمستقبل تحدث التقدم في تسليم الحمولة بالرابطة تعديل مع الببتيدات المشتقة من الفيروس، وقت مناسب لتقديم المظاهرات البصرية من خصائصها البيوكيميائية والوظيفية أثناء التطوير الأولى. هنا، نحن تصف لدينا بروتوكول التقييم الأولية المستمدة من الفيروسات الرابطة تعديل الببتيد لتحديد تراكم داخل الخلايا، واستهداف الورم خلال المرحلة المبكرة بسيطة لكنها فعالة. نستخدم مابس المتاحة تجارياً 3 7 و A14 كمثال نموذج النظم. يصف الإجراء 1 استخدام صفحة الحزب الديمقراطي الصربي كوسيلة تسمح للقرارات ‘الذهاب/لا تذهب’ للرابطة المشيدة. يصف الإجراء 2 طريقة استخدام تريبسينيزيشن السماح للتصور تحسين توزيع التيار المتردد داخل الخلايا وتراكم. يصف الإجراء 3 طريقة لتحسين وجود داخل الخلايا تحديد دقة الترجمة النووية. في هذا الإجراء علينا الاستفادة من حمولة 64Cu (t1/2 = ح 12.7) لأنها عرضه ل efflux الخلوية وهو باعث بوزيترون 10. وهكذا يصف الإجراء 4 في فيفو الورم تستهدف توصيف بالحيوانات الأليفة التصوير لتصور امتصاص الورم بالنسبة إلى الخلفية (أي nontarget الأنسجة السليمة) وتحديد ما إذا كان المثال التيار المتردد يمكن على وجه التحديد وفعالية الأورام المستهدفة. هذه الأساليب كافية للمحققين وضع الرابطة تعديل مع الببتيدات المشتقة من الفيروسات لتحديد المرشحين لمزيد النهوض.

Protocol

وأجريت في فيفو الحيوانات التجارب الموصوفة وفقا بروتوكول المعتمد وفي إطار المبادئ التوجيهية الأخلاقية للجنة الأخلاقيات المركز الاستشفائي الجامعي دي شيربروك “إجراء التجارب على الحيوانات”. 1-جسم الببتيد الاقتران ملاحظة: يمكن تجميعها في أي مصنع الببتيد الت…

Representative Results

للإجراء 1، تعديل تشييد 3 7 مع تشاكنلس باستخدام سالفو-بين الموظفين كما كروسلينكير موثوق بها للغاية. عادة، عند تحميلها على جل 12% وتحليلها من قبل الحزب الديمقراطي الصربي صفحة، هذه النتائج يمكن تمييزها زيادات متدرجة متناسبة مع زيادة نسب سالفو-بين الموظفين-إلى-7 3 ميغاواط في است…

Discussion

الأهداف الرئيسية لإيصال النظمية لعوامل مضادة للسرطان هي زيادة تراكم في موقع الورم، وامتصاص داخل خلايا السرطان، وتقليل الآثار الجانبية غير المرغوب فيها في الأنسجة السليمة. ميلان يستهدف إيصال حمولات الجزيئية للخلايا السرطانية نهج واعدة جداً لعلاج والكشف عن أورام. ومع ذلك، عدم كفاءة الناج…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

تم تمويل هذا العمل من جمعية أبحاث السرطان (كندا) وفي CIMS. يشكر المؤلفون الدكتور سامية آيت-مهند وجان-فرانسوا Beaudoin للحصول على المساعدة. الدكتور أنخيل لوبيز (جامعة جنوب أستراليا) للإنسان والمحيط الحيوي A14.

Materials

Sulfo-SMCC Thermo Scientific 22122 There are many homo- and hetero-bifunctional maleimide crosslinkers to choose from.
Amicon Ultra-0.5 mL Centrifugal Filters EMD Millipore UFC505096 There are pack sizes of 8, 24, and 96. Choose according to your needs.
Precision Plus Protein Kaleidoscope Standards BioRad 1610375EDU Mulicolor recombinant proteins from 10-250 kDa.
Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red Thermo Scientific 25200056 100 or 500 mL volumes to choose from.
Goat anti-Mouse IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 647 conjugate Thermo Scientific A-21235 1-10 μg/mL recommended
NOTA-NHS CheMatech C100
Lamin A/C antibody (N-18) Santa Cruz Biotechnology sc-6215
Rab7 antibody Santa Cruz Biotechnology sc-376362
A14 mAb BD Biosciences 555902
NuPAGE LDS Sample Buffer (4x) Thermo Scientific NP0007
2-Mercaptoethanol Sigma Aldrich M3148-25ML
TF-1a cells ATCC ATCC CRL-2003
RPMI 1640 medium ATCC ATCC 30-2001
RIPA lysis and extraction buffer Thermo Scientific 89900
AMIDE medical imaging software available at amide.sourceforge.net Completely free download
FluoView FV1000 Confocal Microscope Olympus
Fluoview Software Olympus www.olympus-lifescience.com
ITLC strips Biodex 150-771
DOWNLOAD MATERIALS LIST

Referenzen

  1. Verma, S., et al. Trastuzumab emtansine for HER2-positive advanced breast cancer. New England Journal of Medicine. 367 (19), 1783-1791 (2012).
  2. Younes, A., et al. Results of a pivotal phase II study of brentuximab vedotin for patients with relapsed or refractory Hodgkin’s lymphoma. Journal of Clinical Oncology. 30 (18), 2183-2189 (2012).
  3. Bouchelouche, K., Choyke, P. L., Capala, J. Prostate specific membrane antigen- a target for imaging and therapy with radionuclides. Discovery Medicine. 9 (44), 55-61 (2010).
  4. Hamilton, G. S. Antibody-drug conjugates for cancer therapy: The technological and regulatory challenges of developing drug-biologic hybrids. Biologicals. 43 (5), 318-332 (2015).
  5. Deonarain, M. P., Yahioglu, G., Stamati, I., Marklew, J. Emerging formats for next-generation antibody drug conjugates. Expert Opinion on Drug Discovery. 10 (5), 463-481 (2015).
  6. Barok, M., Joensuu, H., Isola, J. Trastuzumab emtansine: mechanisms of action and drug resistance. Breast Cancer Research. 16 (2), (2014).
  7. Wu, A. M., Senter, P. D. Arming antibodies: prospects and challenges for immunoconjugates. Nature Biotechnology. 23 (9), 1137-1146 (2005).
  8. Alley, S. C., Okeley, N. M., Senter, P. D. Antibody-drug conjugates: targeted drug delivery for cancer. Current Opinion in Chemical Biology. 14 (4), 529-537 (2010).
  9. Austin, C. D., et al. Endocytosis and sorting of ErbB2 and the site of action of cancer therapeutics trastuzumab and geldanamycin. Molecular Biology of the Cell. 15 (12), 5268-5282 (2004).
  10. Bryan, J. N., et al. Comparative uptakes and biodistributions of internalizing vs. noninternalizing copper-64 radioimmunoconjugates in cell and animal models of colon cancer. Nuclear Medicine and Biology. 32 (8), 851-858 (2005).
  11. Chen, R., et al. CD30 Downregulation, MMAE Resistance, and MDR1 Upregulation Are All Associated with Resistance to Brentuximab Vedotin. Molecular Cancer Therapeutics. 14 (6), 1376-1384 (2015).
  12. Fuchs, H., Weng, A., Gilabert-Oriol, R. Augmenting the Efficacy of Immunotoxins and Other Targeted Protein Toxins by Endosomal Escape Enhancers. Toxins (Basel). 8 (7), (2016).
  13. Olsnes, S., Sandvig, K., Petersen, O. W., van Deurs, B. Immunotoxins–entry into cells and mechanisms of action. Immunology Today. 10 (9), 291-295 (1989).
  14. Zheng, D., et al. Virus-derived anti-inflammatory proteins: potential therapeutics for cancer. Trends in Molecular Medicine. 18 (6), 304-310 (2012).
  15. Kristensen, M., Birch, D., Morck Nielsen, ., H, Applications and Challenges for Use of Cell-Penetrating Peptides as Delivery Vectors for Peptide and Protein Cargos. International Journal of Molecular Sciences. 17 (2), (2016).
  16. Yezid, H., Konate, K., Debaisieux, S., Bonhoure, A., Beaumelle, B. Mechanism for HIV-1 Tat insertion into the endosome membrane. Journal of Biological Chemistry. 284 (34), 22736-22746 (2009).
  17. Escriou, V., Carriere, M., Scherman, D., Wils, P. NLS bioconjugates for targeting therapeutic genes to the nucleus. Advanced Drug Delivery Reviews. 55 (2), 295-306 (2003).
  18. Pouton, C. W., Wagstaff, K. M., Roth, D. M., Moseley, G. W., Jans, D. A. Targeted delivery to the nucleus. Advanced Drug Delivery Reviews. 59 (8), 698-717 (2007).
  19. Anderson, D. C., et al. Tumor cell retention of antibody Fab fragments is enhanced by an attached HIV TAT protein-derived peptide. Biochemical Biophysical Research Communications. 194 (2), 876-884 (1993).
  20. Chen, P., et al. Nuclear localizing sequences promote nuclear translocation and enhance the radiotoxicity of the anti-CD33 monoclonal antibody HuM195 labeled with 111In in human myeloid leukemia cells. Journal of Nuclear Medicine. 47 (5), 827-836 (2006).
  21. Cornelissen, B., Hu, M., McLarty, K., Costantini, D., Reilly, R. M. Cellular penetration and nuclear importation properties of 111In-labeled and 123I-labeled HIV-1 tat peptide immunoconjugates in BT-474 human breast cancer cells. Nuclear Medicine and Biology. 34 (1), 37-46 (2007).
  22. Costantini, D. L., Chan, C., Cai, Z., Vallis, K. A., Reilly, R. M. (111)In-labeled trastuzumab (Herceptin) modified with nuclear localization sequences (NLS): an Auger electron-emitting radiotherapeutic agent for HER2/neu-amplified breast cancer. Journal of Nuclear Medicine. 48 (8), 1357-1368 (2007).
  23. Fasih, A., et al. (1)(1)(1)In-Bn-DTPA-nimotuzumab with/without modification with nuclear translocation sequence (NLS) peptides: an Auger electron-emitting radioimmunotherapeutic agent for EGFR-positive and trastuzumab (Herceptin)-resistant breast cancer. Breast Cancer Research and Treatment. 135 (1), 189-200 (2012).
  24. Hu, M., et al. Site-specific conjugation of HIV-1 tat peptides to IgG: a potential route to construct radioimmunoconjugates for targeting intracellular and nuclear epitopes in cancer. European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 33 (3), 301-310 (2006).
  25. Kameyama, S., et al. Effects of cell-permeating peptide binding on the distribution of 125I-labeled Fab fragment in rats. Bioconjugate Chemistry. 17 (3), 597-602 (2006).
  26. Kersemans, V., Cornelissen, B., Minden, M. D., Brandwein, J., Reilly, R. M. Drug-resistant AML cells and primary AML specimens are killed by 111In-anti-CD33 monoclonal antibodies modified with nuclear localizing peptide sequences. Journal of Nuclear Medicine. 49 (9), 1546-1554 (2008).
  27. Mie, M., et al. Intracellular delivery of antibodies using TAT fusion protein. Biochemical Biophysical Research Communications. 310 (3), 730-734 (2003).
  28. Niesner, U., et al. Quantitation of the tumor-targeting properties of antibody fragments conjugated to cell-permeating HIV-1 TAT peptides. Bioconjugate Chemistry. 13 (4), 729-736 (2002).
  29. Stein, S., et al. A disulfide conjugate between anti-tetanus antibodies and HIV (37-72)Tat neutralizes tetanus toxin inside chromaffin cells. FEBS Letters. 458 (3), 383-386 (1999).
  30. Tolstikov, V. V., Cole, R., Fang, H., Pincus, S. H. Influence of endosome-destabilizing peptides on efficacy of anti-HIV immunotoxins. Bioconjugate Chemistry. 8 (1), 38-43 (1997).
  31. Gao, C., Leyton, J. V., Schimmer, A. D., Minden, M., Reilly, R. M. Auger electron-emitting 111In-DTPA-NLS-CSL360 radioimmunoconjugates are cytotoxic to human acute myeloid leukemia (AML) cells displaying the CD123/CD131 phenotype of leukemia stem cells. Applied Radiation and Isotopes. 110, 1-7 (2015).
  32. Leyton, J. V., et al. Auger electron radioimmunotherapeutic agent specific for the CD123+/CD131- phenotype of the leukemia stem cell population. Journal of Nuclear Medicine. 52 (9), 1465-1473 (2011).
  33. Paquette, M., et al. NLS-cholic acid conjugation to IL-5Rα-specific antibody improves cellular accumulation and in vivo tumor-targeting properties in a bladder cancer model. Bioconjugate Chemistry. , (2018).
  34. Beaudoin, S., et al. ChAcNLS, a Novel Modification to Antibody-Conjugates Permitting Target Cell-Specific Endosomal Escape, Localization to the Nucleus, and Enhanced Total Intracellular Accumulation. Molecular Pharmaceutics. 13 (6), 1915-1926 (2016).
  35. Boswell, C. A., et al. Effects of charge on antibody tissue distribution and pharmacokinetics. Bioconjugate Chemistry. 21 (12), 2153-2163 (2010).
  36. Shivanna, V., Kim, Y., Chang, K. O. The crucial role of bile acids in the entry of porcine enteric calicivirus. Virology. 456-457, 268-278 (2014).
  37. Shivanna, V., Kim, Y., Chang, K. O. Ceramide formation mediated by acid sphingomyelinase facilitates endosomal escape of caliciviruses. Virology. 483, 218-228 (2015).
  38. Stancevic, B., Kolesnick, R. Ceramide-rich platforms in transmembrane signaling. FEBS Letters. 584 (9), 1728-1740 (2010).
  39. Testa, U., Pelosi, E., Frankel, A. CD 123 is a membrane biomarker and a therapeutic target in hematologic malignancies. Biomarker Research. 2 (1), 4 (2014).
  40. King, M. A. Detection of dead cells and measurement of cell killing by flow cytometry. Journal of Immunological Methods. 243 (1-2), 155-166 (2000).
  41. Paquette, M., et al. Targeting IL-5Rα with antibody-conjugates reveals a strategy for imaging and therapy for invasive bladder cancer. Oncoimmunology. 6 (10), e1331195 (2017).
  42. Zeisler, S. Production of 64Cu on the Sherbrooke TR-PET cyclotron. Journal or Radioanalytical and Nuclear Chemistry. 257 (1), (2004).
  43. Mahmood, T., Yang, P. C. Western blot: technique, theory, and trouble shooting. North American Journal of Medical Sciences. 4 (9), 429-434 (2012).
  44. Roy, M., et al. A dual tracer PET-MRI protocol for the quantitative measure of regional brain energy substrates uptake in the rat. Journal of Visualized Experiments. (82), e50761 (2013).
  45. Wakankar, A. A., et al. Physicochemical stability of the antibody-drug conjugate Trastuzumab-DM1: changes due to modification and conjugation processes. Bioconjugate Chemistry. 21 (9), 1588-1595 (2010).
  46. Liu, J., Abid, S., Lee, M. S. Analysis of monoclonal antibody chimeric BR96-doxorubicin immunoconjugate by sodium dodecyl sulfate-capillary gel electrophoresis with ultraviolet and laser-induced fluorescence detection. Analytical Biochemistry. 229 (2), 221-228 (1995).
  47. Rege, K., Patel, S. J., Megeed, Z., Yarmush, M. L. Amphipathic peptide-based fusion peptides and immunoconjugates for the targeted ablation of prostate cancer cells. Krebsforschung. 67 (13), 6368-6375 (2007).
  48. Zhan, J., Ge, L., Shen, J., Wang, K., Zheng, S. A trans-Golgi network retention signal YQRL fused to ricin A chain significantly enhances its cytotoxicity. Biochemical Biophysical Research Communications. 313 (4), 1053-1057 (2004).
  49. Zhan, J., Stayton, P., Press, O. W. Modification of ricin A chain, by addition of endoplasmic reticulum (KDEL) or Golgi (YQRL) retention sequences, enhances its cytotoxicity and translocation. Cancer Immunology, Immunotherapy. 46 (1), 55-60 (1998).
  50. Zeglis, B. M., Lewis, J. S. The bioconjugation and radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled antibodies. Journal of Visualized Experiments. (96), (2015).

Tags

Keywords: Antibody-conjugatesViral-derived PeptidesCellular AccumulationTumor TargetingPET ImagingNuclear LocalizationTF1A CellsColic-acidMonoclonal AntibodiesTrypsinEDTARPMI1640PFASucroseTriton X-100Alexa Fluor 647
check_url/de/55440?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Diesen Artikel zitieren
Beaudoin, S., Paquette, M., Fafard-Couture, L., Tremblay, M. A., Lecomte, R., Guérin, B., Leyton, J. V. Initial Evaluation of Antibody-conjugates Modified with Viral-derived Peptides for Increasing Cellular Accumulation and Improving Tumor Targeting. J. Vis. Exp. (133), e55440, doi:10.3791/55440 (2018).
Zitat herunterladen
Nachdrucke und Berechtigungen

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image