Dieses Protokoll beschreibt die Stabilisierung der Sauerstoffgehalt in einem kleinen Volumen der recycelten Puffer und methodischen Aspekten der Aufnahme aktivitätsabhängige synaptische Plastizität in getauchten akute hippocampal Scheiben.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Aufnahme synaptische Plastizität in akuten Hippocampal Scheiben gepflegt in einem kleinvolumigen Recycling - Perfusions- und untertauchen-Typ-Kammer-System
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Obwohl Experimente an Hirnschnitten seit 1951 im Einsatz gewesen, noch Probleme, die die Wahrscheinlichkeit, dass eine stabile und erfolgreiche Analyse der synaptischen Übertragung Modulation bei potenziellen oder intrazellulären Feldaufnahmen zu reduzieren. Dieses Manuskript beschreibt methodische Aspekte, die bei der Verbesserung der experimenteller Bedingungen für die Aufrechterhaltung der akuten Hirnschnitten und zum Aufzeichnen von Feld exzitatorischen postsynaptischen Potenziale in einer handelsüblichen untertauchen Kammer hilfreich sein könnten mit einem Abfluss-Carbogenation. Die Abfluss-Carbogenation hilft, um den Sauerstoffgehalt in Experimenten zu stabilisieren, die verlassen sich auf das recycling von einem kleinen Puffer Reservoir zur Verbesserung der Wirtschaftlichkeit der Droge Experimente. Darüber hinaus präsentiert das Manuskript repräsentative Experimente, die die Auswirkungen von verschiedenen Carbogenation-Modi und Stimulation Paradigmen auf die aktivitätsabhängige synaptische Plastizität der synaptischen Übertragung untersuchen.
Einleitung
1951 wurden die ersten gemeldeten akuten Gehirn Slice Experimente durchgeführt1. 1971, nach erfolgreichen in-vitro- Aufnahmen von Piriform Rinde2,3 und die Entdeckung, dass hippocampale Neuronen quer entlang der Septotemporal Achse des Hippocampus4, eines miteinander der in-vitro- Ersteinspielungen von hippocampal neuronalen Aktivität erreicht5war. Die Ähnlichkeit der neurophysiologischen oder Neurostructural Parameter der Neuronen in Vivo und in Vitro Bedingungen sind noch Gegenstand der Debatte
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Protokoll
Die Tiere wurden im Einklang mit den etablierten Standards der Pflege der Tiere und Verfahren des Institute of Brain Science und State Key Labor der medizinischen Neurobiologie der Fudan University, Shanghai, China aufrechterhalten.
1. Vorbereitung der Lösung
Hinweis: Siehe Tabelle der Materialien.
- Bereiten Sie den slicing Puffer (modifizierte Gey-Lösung): 92 mM NaCl, KCl, 1,25 mM NaH2PO4, 30 mM Nahco33, 2, 5 mM 25 mM Glukose, 20 mM HEPES, 3 mM Na+-Pyruvat, 10 mM MgSO4und 0,5 mM CaCl2.
- Stellen Sie den pH-Wert auf 7,6 mit 1 M NaOH ohne Carbogenation.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Ergebnisse
Im Abschnitt Protokoll beschrieben wir die Vorbereitung der akuten hippocampal Scheiben aus dem ventralen und mittleren Teil der hippocampalen Bildung (Abbildung 1) von männlichen C57BL/6 Mäusen und männliche Wistar-Ratten (5-8 Wochen). Die Position der Hemisphären auf der Aufschnittmaschine-Plattform hilft um sie stabil zu halten und beseitigt die Notwendigkeit der Stabilisierung mit Agar oder Agarose. Die Perfusion System selbst basiert auf einer peristalti.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Obwohl Schnittstelle Slice Kammern robuster synaptische Antworten25,26,27,28aufweisen, bieten untertauchen Kammern zusätzlichen Komfort für die Patch-Clamp-Aufnahme und Fluoreszenz Imaging. So haben wir beschrieben, verschiedene Aspekte der möglichen Feldaufnahmen in akuten hippocampal Scheiben mit einer kommerziellen untertauchen Slice-Kammer, die leicht auf die Darstellung der Fluoreszenz Son.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Die Autoren erklären, dass die Forschung in der Abwesenheit von kommerziellen oder finanziellen Beziehungen geführt wurde, die als ein potenzieller Interessenkonflikt ausgelegt werden könnte.
Danksagungen
W.W durchgeführt, analysiert, und die Experimente entworfen und schrieb das Manuskript. D.X. und C.P Abbildung Vorbereitung unterstützt und die Experimente durchgeführt. Diese Arbeit wurde unterstützt von NSFC (31320103906) und 111-Projekt (B16013), T.B.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Reagenzien erforderlich | |||
| NaCl | Sinopharm chemisches Reagenz, China | 10019318 | |
| KCl | Sinopharm chemisches Reagenz, China | 10016318 | |
| KH2PO4 | Sinopharm chemisches Reagenz, China | 10017618 | |
| MgCl2 · 6H2O | Sinopharm Chemisches Reagenz, China | 10012818 | |
| CaCl2 | Sinopharm Chemisches Reagenz, China | 10005861 | |
| NaHCO3 | Sinopharm Chemisches Reagenz, China | 10018960 | |
| Glucose | Sinopharm Chemisches Reagenz, China | 10010518 | |
| NaH2 PO4 | Sinopharm Chemisches Reagenz, China | 20040718 | |
| HEPES | Sigma | H3375 | |
| Natriumpyruvat | Sigma | A4043 | |
| MgSO4 | Sinopharm Chemisches Reagenz, China | 20025118 | |
| NaOH | Sinopharm Chemisches Reagenz, China | 10019718 | |
| Werkzeuge und Materialien zum Sezieren | |||
| Enthaupter | Harvard apparatus | 55-0012 | für Rattenenthauptung |
| Verbandschere | SCHREIBER | 12-4227 | für Mäuse-Enthauptung |
| Doppelschneidklinge | Flying Eagle, China | 74-C | |
| IRIS Schere | RWD, China | S12003-09 | |
| Bone Rongeurs | RWD, China | S22002-14 | |
| Löffel | Hammacher | HSN 152-13 | |
| Zahnzementspachtel | Hammacher | HSN 016-15 | |
| Dental-Doppelendbagger | Blacksmith Surgical, USA | BS-415-017 | |
| Vibrierendes Mikrotom | Leica, Deutschland | VT1200S | |
| chirurgische Klinge | RWD, China | S31023-02 | |
| chirurgischer Halter | RWD, China | S32007-14 | |
| Elektrophysiologie Geräte und Materialien | |||
| Vertikaler Pipettenabzieher | Narishige, Japan | PC-10 | |
| Schwingungsisolationstisch | Meirits, Japan | ADZ-A0806 | |
| Unterwasser-Aufzeichnung Kammer | Warner Instruments | RC-26GLP | |
| 4-Achsen-Mikromanipulator | Sutter, USA | MP-285, MP-225 | |
| Platindraht | World Precision Instruments | PTP406 | |
| Verstärker | Molekulare Geräte, USA | Multiclamp 700B | |
| Datenerfassungssystem | Molekulare Geräte, USA | Digidata 1440A | |
| Analyse Software | Molecular Devices, USA | Clampex 10.2 | |
| Fluoreszenzmikroskop | Nikon, Japan | FN1 | |
| LED-Lichtquelle | Lumen Dynamics Group, Kanada | X-cite 120LED | |
| Mikropipetten | Harvard Apparat | GC150TF | extrazelluläre Aufzeichnung |
| Borosilikat-Mikropipetten | Sutter, USA | BF150-86 | Patch-Klemme |
| Wolframelektrode | A-M Systems, USA | 575500 | |
| Schlauchpumpe | Länger, China | BT00-300T | |
| Schläuche für Schlauchpumpe | ISMATEC, Wertheim, Deutschland | SC0309 | 1x Zulauf, ID: 1,02 mm |
| Rohre für Schlauchpumpe | ISMATEC, Wertheim, Deutschland | SC0319 | 2x Rohre für Abfluss, ID: 2,79 mm |
| CCD-Kamera | PCO, Deutschland | pco.edge sCMOS | |
| Objektivreinigungspapier | Kodak | ||
| 50 mL konisches Zentrifugenröhrchen | Thermo scientific | 339652 | |
| Vorkammer | Warner Instruments | BSC-PC | |
| Inline-Heizung | Warner Instruments | SF-28 | |
| Temperaturregler | Warner Instruments | TC-324B |
Referenzen
- McIlwain, H. Metabolic response in vitro to electrical stimulation of sections of mammalian brain. Biochem J. 48 (4), (1951).
- McIlwain, H., Richards, C. D., Somerville, A. R. Responses in vitro from the piriform cortex of the rat....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
