Gesättigte Fettsäuren induzieren Ceramid-assoziierten Makrophagen Zelltod

Zusammenfassung

Wir zeigen eine geradlinige Methode murine primären Makrophagen von Knochenmarkzellen zur Ableitung und eine einfache Methode zur Vorbereitung von BSA-Fettsäure konjugiert. Dann zeigen wir, dass gesättigter Fettsäuren Makrophagen Zelltod induzieren können, und solchen Zelltod positiv assoziiert mit zellulären Akkumulation von Ceramid-Ebenen ist.

Zusammenfassung

Makrophagen express hoch epidermale Fettsäure-bindendes Protein und Fett Fettsäure-bindendes Protein. Sie aktiv Aufnahme gesättigten und ungesättigten Fettsäuren, die eine entscheidende Rolle bei der Regulierung der Immunfunktionen spielen könnte. Zahlreiche Studien haben gezeigt, dass verschiedene Fettsäuren, gesättigt oder ungesättigt, können unterschiedliche Auswirkungen auf das Zellwachstum und die Funktion besitzen. Allerdings variieren die Ansätze für die Fettsäure-Vorbereitung zu unphysiologischen Ergebnissen führen kann. Serum-Albumin, natürliche Träger für Fettsäuren in peripheren Säugetierblut wird empfohlen zur Bildung einer konjugiert komplex mit das Natriumsalz von Fettsäuren, Fettsäure-Funktion in Säugerzellen, minimiert die Toxizität von Fettsäure-Seife zu untersuchen. Somit ist eine einfache, relativ schnelle Heizung und beschallen Methode entwickelt und präsentiert hier für BSA-Fettsäuren konjugierte Säurebildung. Wir beschreiben ein Protokoll mit gesättigten Fettsäuren, vor allem Stearinsäure Säuren zu schweren Zelltod in der Maus Knochenmark abgeleitet Makrophagen induzieren. Wir zeigen weiter, dass gesättigte Fettsäure-induzierte Zelltod mit kumulierten zellulären Ceramid-Spiegel positiv assoziiert ist. Diese Methode kann für Studien über die Auswirkungen der Fettsäure auf andere Säugetier-Zellen erweitert werden.

Einleitung

Fettsäuren spielen eine wichtige Rolle im Energiestoffwechsel und in der Synthese der Phospholipide der Membran in verschiedenen Arten von Zellen. Fettsäuren haben eine geringe wässrige Löslichkeit. Entsprechende Vorbereitung der Fettsäure ist von entscheidender Bedeutung für die Erforschung der biologischen Funktionen der Fettsäuren in Säugerzellen. Wenn Fettsäuren mit Ethanol vorbereitet sind, kann viele Fettsäuren ihre giftigen Seife (Reinigungsmittel) Wirkung auf die Zellmembran, auch bei relativ niedrigen Konzentrationen¹angezeigt. Als natürliche, große Transporter für die freien Fettsäuren im Serum gilt als Serum-Albumin einen guten Träge....

Protokoll

das Protokoll von der institutionellen Animal Care und Nutzung Committee (IACUC) der University of Louisville gebilligt wurde.

1. Maus Knochenmark abgeleitet Makrophagen (BMDMs)

1. einschläfern eine 6 bis 8 Wochen alten, gesunden Wildtyp-Maus mit CO ₂. Heften Sie es auf eine Dämmplatte und sprühen Sie es mit 70 % Ethanol, bis es getränkt ist. Entfernen Sie die Tibia/Femur-Knochen mit Zange und Schere. Setzen Sie sie in einer Petrischale mit 5 mL 1 x Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS). Führen Sie alle Verfahren unter sterilen Bedingungen.
2. Aufschneiden beide Enden der Tibia/Femur-Knochen mit einer Schere in....

Ergebnisse

Fettleibigkeit erhöht freie Fettsäure-Konzentrationen im Serum. Als professionelle Phagozyten aufgreifen Makrophagen aktiv Fettsäuren zu Host Homöostase. Bei diesen Prozessen können überladene Lipide Makrophagen Zelltod auslösen. Zu diesem Zweck wir BMDMs kultiviert in Vitro mit übergewichtigen diätetischen Fettsäuren und gemessenen Makrophagen Zelltod mit Flow durchflusszytometrischen Färbung. Im Vergleich zur BSA-Kontrolle, gesättigten Fettsäuren, induziert insbesondere Stearin.......

Diskussion

Die richtige Vorbereitung der Fettsäure-Lösung ist von entscheidender Bedeutung für die biologische Funktion von Fettsäuren zu studieren. Die Neutralisation der Fettsäuren erhöht die Löslichkeit in wässriger Lösung. Natriumsalze der Fettsäuren, vor allem gesättigte Fettsäuren, sind jedoch noch der geringe Löslichkeit in Wasser oder PBS, wie wir beobachten. Eine Methode ist mit 95-100 % Ethanol helfen Fettsäure¹auflösen. Mit dieser Methode kann auch bei niedrigeren Konzentrationen für weniger gifti.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
CPX Ultraschallbad	Bransonic	Modell 2800
Natriumpalmitat (PA)	Nu-Chek Prep, Inc.	S-1109	M.W. 278
Natriumstearat (SA)	Nu-Chek Prep, Inc.	S-1111	M.W. 306
Rinderserumalbumin (BSA), fettsäurefrei	Fisher Scientific	9048-46-8
Maus-Makrophagen-Kolonie-stimulierender Faktor (mM-CSF)	Zellsignaltechnologie  Inc.	5228
RPMI 1640	VWR International	71002-878
Annexin V, Alexa Fluor 488 Konjugat	Fisher Scientific	A13201
7-AAD	BD Biosciences	559925
Monoklonaler Anti-Ceramid-Antikörper (Maus IgM)	Sigma	C8104-50TST	Klon: MID 15B4
Ziege Anti-Maus IgM Antikörper & Mikrokette, FITC Konjugat	Sigma	AP128F
Fixierungspuffer	Biolegend	420801
Permeabilisierungspuffer	Ebioscience	4307693
Lysepuffer für rote Blutkörperchen	Sigma	11814389001
Annexin V Binding Buffer	BD Biosciences	556454
L929 Zellen	ATCC	CCL-1
Corning  Zell-Lifter	Fisher Scientific	07-200-364
Hinweis: M.W. steht für das Molekulargewicht.