Diese Methode beschreibt die Platzierung der Zwischenschaltung Vene Transplantationen bei Kaninchen, die Transduktion der Grafts und die Erreichung des dauerhaften Transgene Ausdruck. Dies ermöglicht die Untersuchung der physiologischen und pathologischen Rollen von transgenen und deren Proteinprodukte in veredelten Adern und Prüfung der Gentherapien für Venenleiden Transplantat.
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Methodenartikel
Ein Kaninchen-Modell der dauerhafte Transgene Ausdruck in Halsschlagader, gemeinsame Halsschlagader Interposition Grafts
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Ader-Transplantat-Bypass-Chirurgie ist eine gemeinsame Behandlung für arterielle Verschlusskrankheit; langfristiger Erfolg wird jedoch durch Transplantat Versagen aufgrund von Arteriosklerose, Thrombose und Intima-Hyperplasie begrenzt. Das Ziel dieses Artikels ist zu zeigen, ein Verfahren zur bilateralen venösen Zwischenschaltung Transplantate in ein Kaninchen zu platzieren, dann transducing die Transplantate mit einem Gen-Transfer-Vektor, der dauerhafte Transgene Ausdruck erreicht. Die Methode ermöglicht die Untersuchung der biologischen Rollen von Genen und deren Proteinprodukte in normalen Vene Transplantat Homöostase. Es erlaubt auch das Testen von transgenen für Aktivitäten, die Vene Transplantat Versagen, z.B.verhindern könnte., ob der Ausdruck ein Transgen verhindert das Wachstum von Neointimal, reduziert die vaskuläre Entzündung oder reduziert Atherosklerose bei Kaninchen gefüttert mit einer fettreichen Diät. Während einer Operation zunächst überleben sind die Segmente des rechten und linken äußeren Halsschlagader herausgeschnitten und bilateral als umgekehrte Ende-zu-Seite Gemeinsame Halsschlagader Zwischenschaltung Transplantate platziert. Während einer zweiten überleben operiert, 28 Tage später jeder der Grafts ist isoliert aus dem Kreislauf mit vaskulären Clips und die Lumen (über eine arteriotomie) mit einer Lösung, die Helfer-abhängige adenoviralen Vektor (ADHD) gefüllt sind. Nach einer 20-min Inkubation die Vektor-Lösung wird abgesaugt, die arteriotomie repariert und Strömung wird wiederhergestellt. Geerntet werden die Venen zu Zeitpunkten einzelne experimentelle Protokolle diktiert. Die 28-Tage Verzögerung zwischen der Transplantat-Platzierung und die Transduktion ist notwendig, um die Anpassung des Transplantats Vene, die arterielle Durchblutung zu gewährleisten. Diese Anpassung verhindert schnellen Verlust der Transgen-Ausdruck, der in Vene Transplantationen ausgestrahlt vor oder unmittelbar nach der Transplantation auftritt. Die Methode ist einzigartig in seiner Fähigkeit, dauerhafte, stabile Transgene Ausdruck in veredelten Adern zu erreichen. Im Vergleich zu anderen großen Tieren Vene Transplantat Modelle, haben Kaninchen Vorteile von niedrigen Kosten und einfache Handhabung. Im Vergleich zu Nagetier Vene Transplantat Modelle, haben Kaninchen größer und leichter zu manipulieren Blutgefäße, die reichlich Gewebe zur Analyse zur Verfügung zu stellen.
Einleitung
Arteriosklerose ist eine chronische entzündliche Erkrankung, die in der Lipid-Akkumulation und Entzündungen in der Gefäßwand zur Verengung des Schiffes Lumen, Herzinfarkt, Schlaganfall und Verlust von Gliedmaßen1,2 führen. Perkutane Eingriffe (zB., Angioplastie und Stentimplantation) und medikamentöse Therapie (zB., Statine und thrombozytenaggregations-Agenten) gibt nützliche Behandlungen für Arteriosklerose; Sie sind jedoch oft unwirksam bei der Behandlung von schweren obstruktiven Erkrankungen in der koronaren und peripheren Zirkulation. Bypass-Operation, mit autogenen Venen Segmenten, blei....
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Protokoll
Alle tierischen Protokolle und Studien wurden von der University of Washington Büro Tierschutz genehmigt.
(1) vor der Operation (für alle Operationen)
- Die Kaninchen mit 30 mg/kg Ketamin und 1,5 mg/kg Xylazin durch intramuskuläre Injektion (IM) in den Paraspinous Muskeln zu betäuben.
Hinweis: Nahrung und Wasser werden vor der Operation nicht eingeschränkt. - Während des Wartens auf ausreichende Tiefe der Narkose, die Tische in den Vorbereitungsraum und OP-Saal (OR) eingerichtet.
- Bereiten Sie den Vorbereitungsraum für die Rasur des Kaninchens Hals und die Platzierung der intravenöse (IV) Hafen im Ohr (nur überlebe....
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Ergebnisse
Die technische Leistungsfähigkeit eines neuen Betreibers muss überprüft werden, bevor der Betreiber diese Methode verwenden kann, um experimentelle Daten zu generieren. Der erste Meilenstein, den ein neuer Betreiber zu erreichen, müssen ist konsequente Vene Transplantat Durchgängigkeit nach der ersten Vene Pfropfung Operation und die anschließende verzögert Transduktion Chirurgie. Über 90 % Durchgängigkeit nach jeder der Operationen wünschenswert und realisierbar ist. Die Durchgängigkeit .......
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Diskussion
Wichtige Schritte in diesem Protokoll gehören die Verwaltung der Anästhesie, Antikoagulation, chirurgische Manipulation der Vene Arterie/veredelt und hämodynamische Messungen der veredelten Ader. Ordnungsgemäße Verwaltung der Anästhesie ist von entscheidender Bedeutung in diesem mehrere überleben Chirurgie Modell mit zwei relativ langen Operationen (in der Regel 3-3,5 h für bilaterale Vene Pfropfen und 1,5-2,5 h für bilaterale Transplantat Transduktion). Wir haben Anästhesie über eine Nosecone und durch endotracheale Int.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Disposables3mL | |||
| Spritze mit 24G Nadel | Becton Dickinson | 309571 | 2x für Venentransplantationen; 2x für Gentransfer Chirurgie |
| 1 mL Spritze mit 27G Nadel | Becton Dickinson | 309623 | 2x für Venentransplantationen, 5x für Gentransfer-Chirurgie |
| 19G Nadel | Becton Dickinson | 305187 | Gen Transferchirurgie |
| 20 ml Spritze, Luer-Lock | Nipro Medical Corp | JD+20L | |
| Katheter, 24Ga x 3/4" | Terumo Medical Products | SROX2419V 21G | |
| Nadel | Becton Dickinson | 305165 | Gentransfer-Chirurgie und für 20 mL Spritze mit Kochsalzlösung |
| Gaze 4" x 4" | Dynarex | 3242 | ~10-15 pro Operation |
| 3-0 Seidennaht | Covidien Ltd. | S-244 | |
| 5-0 Seidennaht | Covidien Ltd. | S-182 | |
| 7-0 Polypropylen-Nahtmaterial | CP Medical | 8703P | Venentransplantat-Chirurgie |
| 7-0 Polypropylen-Nahtmaterial | CP Medical | 8648P | Gentransfer-Chirurgie |
| 5-0 Polyglykolsäure-Naht | CP Medical | 421A | |
| 3-0 Polyglykolsäure-Naht | CP Medical | 398A | |
| Alkoholtupfer | Covidien Ltd. | 6818 | Für die Platzierung des intravenösen |
| Kathetersteckers | Vetoquinol | 411498 | |
| Ketamin HCl, 100 mg/ml | Vedco Inc. | ||
| Xylazin, 100 mg/ml | Akorn Inc. | 4821 | |
| Lidocain, 20 mg/ml, | Pfizer | 409427702 | |
| 0,5% | Pfizer | 409161050 | |
| Beuthanasia D-Special | Intervet Inc. | NDC 00061047305 | Nur Ernteoperation |
| Buprenorphin HCl, 0,3 mg/ml | Patterson Veterinary 12496075705 | ||
| Kochsalzlösung IV-Beutel, 0,9 % Natriumchlorid | Baxter | 2B1309 | |
| Heparin (5000 U/ml) | APP Pharmaceuticals | NDC 63323-047-10 | |
| Papaverin (3,5 mg/ml) | American Reagent Inc. | NDC 0517-4002-25 | Verdünnt aus 30 mg/ml Bestand; Verwenden Sie maximal 1 ml |
| Fentanyl-Pflaster, 25 μg/h | Apotex Corp. | NDC 60505-7006-2 | |
| Isofluran | Mehrere Anbieter | Katalognummer nicht verfügbar | |
| Viraler Vektor | Nur Gentransfer-Chirurgie | ||
| Chirurgische Instrumente | |||
| Metzenbaum Nadelhalter 7" gerade | Roboz | RS-7900 | |
| Operationsschere 6,5" gerade stumpf/stumpf | Roboz | RS-6828 | |
| Nadelhalter /mit Nahtschere | Miltex | 8-14-IMC | |
| Castroviejo Schere | Roboz | RS-5658 | |
| Castroviejo Nadelhalter, 5.75" gerade mit Schloss | Roboz | RS-6412 | |
| Stevens Schere 4.25" gebogen stumpf/stumpf | Roboz | RS-5943 | |
| Alm Retraktor 4" 4X4 5mm stumpfe Zinken | Roboz | RS-6514 | 2x |
| Backhaus Handtuchklemme 3.5" | Roboz | 4x | |
| Micro Clip Setting Pinzette 4.75" | Roboz | RS-6496 | |
| Micro Vascular Clips, 11 mm | Roboz | ||
| Surg-I-Loop | Scanlan International | 1001-81M | 5 cm Länge |
| Bonaccolto Pinzette, 4" (10 cm) lange Längsverzahnung, gekreuzte Spitze, 1,2 mm Spitzenbreite | Roboz | RS-5210 | |
| Dumont #3 Pinzette Inox-Spitzengröße .17 × .10 mm | Roboz | RS-5042 | |
| Graefe Pinzette, 4" (10 cm) lang, gezahnt, gerade, 0,8 mm Spitze | Roboz | RS-5280 | |
| Halstead Mückenzange, 5" gerade, 1,3 mm Spitzen | Roboz | RS-7110 | 2x |
| Halstead Mückenzange, 5" gebogen, 1,3mm Spitzen | Roboz | RS-7111 | |
| Jacobson Mückenzange 5" gebogen extra zart, 0,9 mm Spitzen | Roboz | RS-7117 | |
| Kantrowitz Pinzette, 7.25" 90 Grad zart, 1.7 mm Spitzen | Roboz | RS-7305 | |
| Gewebezange 5", 1X2 Zähne, 2 mm Spitzenbreite | Roboz | RS-8162 | |
| Allis-Baby Pinzette, 12 cm, 4x5 Zähne, 3 mm Spitzenbreite | Fine Science Tools | 11092-12 | 2x |
| Adson Pinzette, 12 cm, gezahnt, gerade | Fine Science Tools | 11006-12 | |
| Veterinär-Elektrochirurgie Handstück und Elektrode | MACAN Manufacturing | HPAC-1; R-F11< | |
| strong>Surgical Suite Equipment | |||
| Zirkulierende Warmwasserdecke und -pumpe | Mehrere Anbieter | Katalognummer nicht verfügbar | |
| Bair Hugger Wärmeeinheit | 3M | Modell 505 | |
| IV Infusionspumpe | Heska | Vet IV 2.2 | |
| Isofluran Verdampfer und Scavenger | Mehrere Anbieter | Katalognummer nicht verfügbar | |
| Multiparameter-Monitor für Veterinärmedizin | Surgivet | Surgivet Advisor | |
| Veterinär-Elektrochirurgiegerät | MACAN Manufacturing | MV-9 | |
| Operationsmikroskop | D.F. Vasconcellos | M900 | 25-fache Vergrößerung für die Venentransplantationschirurgie; 16-fache Vergrößerung für die Gentransfer-Chirurgie |
Referenzen
- Libby, P., Bornfeldt, K. E., Tall, A. R. Atherosclerosis: Successes, Surprises, and Future Challenges. Circ Res. 118, 531-534 (2016).
- Fowkes, F. G., et al. Comparison of global estimates of prevalence and ris....
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Nachdrucke und Genehmigungen
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