Das in der aktuellen Studie entwickelte Modell für akutes Leberversagen stellt eine praktikable Alternative zur Untersuchung potenzieller Therapien dar. Das aktuelle Modell nutzt die kombinierte Wirkung von körperlichen und drogeninduzierten Leberverletzungen und bietet ein geeignetes Zeitfenster, um das Potenzial neuartiger Therapien zu untersuchen.
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Methodenartikel
Generierung eines Rattenmodells für akutes Leberversagen durch Kombination von 70% partieller Hepatektomie und Acetaminophen
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Akutes Leberversagen (ALF) ist ein klinischer Zustand, der durch verschiedene Ätiologien verursacht wird, was zum Verlust von metabolischen, biochemischen, synthetisierenden und entgiftenden Funktionen der Leber führt. In den meisten irreversiblen Leberschäden, orthotrope Lebertransplantation (OLT) bleibt die einzige verfügbare Behandlung. Um das therapeutische Potenzial einer Behandlung für ALF zu untersuchen, ist ihre vorherige Prüfung in einem Tiermodell von ALF unerlässlich. In der aktuellen Studie wurde ein ALF-Modell bei Ratten entwickelt, indem 70% partielle Hepatectomie (PHx) und Injektionen von Acetaminophen (APAP) kombiniert wurden, das ein therapeutisches Fenster von 48 h bietet. Die medianen und linken seitlichen Lappen der Leber wurden entfernt, um 70% der Lebermasse zu verbrauchen und APAP wurde 24 h postchirurgisch für 2 Tage gegeben. Das Überleben bei ALF-induzierten Tieren wurde als stark verringert. Die Entwicklung von ALF wurde durch veränderte Serumspiegel der Enzyme Alanin-Aminotransferase (ALT), Aspartat-Aminotransferase (AST), alkalische Phosphatase (ALP); Veränderungen der Prothrombinzeit (PT); und Bewertung des international normalisierten Verhältnisses (INR). Die Untersuchung des Genexpressionsprofils durch qPCR ergab einen Anstieg der Expressionskonzentrationen von Genen, die an Apoptose, Entzündungen und am Fortschreiten der Leberverletzung beteiligt sind. Diffuse Degeneration von Hepatozyten und Infiltration von Immunzellen wurde durch histologische Auswertung beobachtet. Die Reversibilität von ALF wurde durch die Wiederherstellung des Überlebens- und Serumspiegels von ALT, AST und ALP nach intrasplenischer Transplantation syngenischer gesunder Rattenhepatozyten bestätigt. Dieses Modell stellt eine zuverlässige Alternative zu den verfügbaren ALF-Tiermodellen dar, um die Pathophysiologie von ALF zu untersuchen und das Potenzial einer neuartigen Therapie für ALF zu bewerten. Die Verwendung von zwei verschiedenen Ansätzen ermöglicht es auch, die kombinierte Wirkung von körperlichen und drogeninduzierten Leberverletzungen zu untersuchen. Die Reproduzierbarkeit und Durchführbarkeit des laufenden Verfahrens ist ein zusätzlicher Vorteil des Modells.
Einleitung
Akutes Leberversagen (ALF) wird von der American Association for the Study of Liver Diseases als schnelle Entwicklung akuter Leberschäden ohne vorherige Anzeichen von Schäden definiert und ist durch eine schwere Beeinträchtigung der synthetischen, metabolischen und entgiftenden Funktionen der Leber gekennzeichnet1. ALF unterscheidet sich von chronischem Leberversagen, bei dem das Versagen als Folge von Leberschäden über einen langen Zeitraum verursacht und von akutem chronischem Leberversagen (ACLF), wo abrupte Leberschäden als Folge von chronischen Lebererkrankungen2,3,
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Protokoll
Das unten beschriebene Verfahren wurde von der Institutional Animal Ethics Committee of National Institute of Immunology, Neu-Delhi, genehmigt. Die Seriennummer der Zulassung lautet IAEC-355/14.
1. Vorbereitung
- Bereiten Sie sich auf den chirurgischen Eingriff vor, wie zuvor von Das B et al.26beschrieben.
- Verwenden Sie 6–8 Wochen alte inzuchtige Wistar-Ratten mit einem Körpergewicht von 200–250 g.
- Die Tiere unter normalen Tierpflegebedingungen unterbringen und vor und nach dem Eingriff mit Ratten-Chow und Libitum füttern.
- Verwenden Sie bei der Ausführung von 70 % PHx eine Standa....
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Ergebnisse
Überlebensprozentsatz in Tiermodellen von ALF
Die optimale Dosis von APAP, die ALF in Kombination mit 70% PHx verursachte, wurde als 750 mg/kg Körpergewicht standardisiert. Das Behandlungsschema begann 24 h nach 70% PHx, als sich die Tiere vollständig von der Operation erholt hatten, und bestand aus zwei APAP-Dosen in 24-Stunden-Intervallen. Die Sterblichkeit wurde mit einer Rate von 80% nach der Verabreichung der zweiten Dosis von APAP, 48 h nach der Operation beobachtet. Der Überlebensprozentsatz wu.......
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Diskussion
Die Entwicklung eines geeigneten Tiermodells für ALF ist für ein besseres Verständnis der Pathogenese und des Fortschreitens von ALF von größter Bedeutung. Ein gut charakterisiertes ALF-Tiermodell bietet auch die Möglichkeit, neue therapeutische Ansätze gegen ALF zu entwickeln und zu erproben. Es wurden viele Versuche unternommen, ein klinisch relevantes Modell von ALF6,12,21,23,
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts zu verraten.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde durch den Kernzuschuss des Department of Biotechnology, Government of India an das National Institute of Immunology, Neu-Delhi, unterstützt.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Paracetamol (Biocetamol) | EG Pharmaceuticals | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Alkalisches Phosphatase-Kit (DEA) | Coral Clinical System, Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Automatisiertes Analysegerät | Tulip, Alto Santracruz, Indien | Screen Maaster 3000 | Biochemisches Analysegerät für Leberfunktionstest |
| Betadin ( Povidon-Jod-Lösung) | Win-Medicare; Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Biologische Sicherheitswerkbank (Klasse I) | Kartos international; Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Hellfeldmikroskop | Olympus, Japan | LX51 | |
| Cefotaxim (Taxim®) | AlKem; Indien | Cefotaxim-Natrium-Injektion, keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Zellsieb | Sigma; US | CLS431752 | |
| Kollagenase Typ I | Gibco von Life Technologies | 17100-017 | |
| Wattestäbchen | Pure Swabs Pvt Ltd; Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Abdecktuch | JSD Surgicals, Delhi, Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| DPX Mountant | Sigma; US | 6522 | |
| Eosin Y-Lösung, alkoholisches | Sigma; US | HT110132 | |
| Zangen | Große chirurgische Eingriffe; Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Gasanästhesiesystem | Ugo Basile; Italien | 211000 | |
| Glucose | Himedia, Indien | GRM077 | |
| Haarentfernungscreme (Veet®) | Reckitt Benckiser, Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Hämatoxylin-Lösung, Mayer's | Sigma; US | MHS16 | |
| Heparin-Natriumsalz | Himedia; Indien | RM554 | |
| Hyaluronidase aus Schafen Hoden | Sigma; US | H6254 | |
| I.V. Kanüle (Plusflon) | Mediplus, Indien | Ref 1732411420 | |
| Insulinspritzen | BD; US | REF 303060 | |
| Isofluran (Foran®) | Asecia Queenborough | Nr. B506 | Inhalationsanästhetikum |
| Ketamin (Ketamax®) | Troikaa Pharmaceuticals GmbH | IP für Ketaminhydrochlorid, keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Meloxicam (Melonex®) | Intas Pharmaceuticals Ltd; Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Mikronadelhalter gerade & gebogener | Mercian; England | BS-13-8 | |
| Mikro-Nadelhalter gerade & gebogener | Mercian; England | BS-13-8 | |
| Mikrotom | Histo-Line Laboratories, Italien | MRS3500 | |
| Nylon Thread | mächtig; Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Paraformaldehyd | Himedia; Indien | GRM 3660 | |
| Percoll® | GE Healthcare | 17-0891-01 | |
| Refresh Tears/Eyemist Gel | Allergan India Private Limited/Sun Pharma, India | P3060 | Keine spezifische Katalognummer |
| RPMI | Himedia; Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Scalpel | Major Ssurgeonicals; Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Schere | Große Chirurgie; Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| SGOT (ASAT) KIT Coral | Clinical System, Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| SGPT (ALAT) KIT | Coral Clinical System, Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Shandon Cryotome E Cryostat | Thermo Electron Corporation; US | Keine spezifische Katalognummer | |
| Saccharose | Sigma; US | S0389 | |
| Chirurgische Klinge Nr. 22 | La Medcare, Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Chirurgische Platine | lokal hergestellt | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Chirurgisches weißes Klebeband | 3M Indien; Indien | 1530-1 | Mikroporen-Chirurgie-Bandnähte |
| Ethicon, Johnson & Johnson, Indien | NW 5047 | ||
| Spritzen (1ml, 26 g) | Dispo Van; Indien | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| Trimmer (Clipper) | Philips | NL9206AD-4 DRACHTEN QT9005 | |
| Waage | Braun | Keine spezifische Katalognummer (lokale Beschaffung) | |
| William's E Media | Himedia; Indien | AT125 | |
| Xylazin (Xylaxin®) | Indian Immunologicals Limited | Beruhigungsmittel, Präanästhetikum, Analgetikum und Muskelrelaxans |
Referenzen
- Polson, J., Lee, W. M. AASLD position paper: the management of acute liver failure. Hepatology. 41, 1179-1197 (2005).
- Chung, R. T., et al. Pathogenesis of liver injury in acute liver failure. Gastroenterology. 143, 1-7 (2012).
- Fyfe, B., Zaldana, F., Liu, ....
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Nachdrucke und Genehmigungen
