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Methodenartikel

Ein Silikose-Mausmodell, das durch wiederholtes Einatmen von kristallinem Quarzstaub hergestellt wurde

3.1K Aufrufe

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DOI:

10.3791/64862

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6. Januar 2023

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* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Etablierung eines Mausmodells der Silikose durch wiederholte Exposition gegenüber Kieselsäuresuspensionen über einen Nasentropf. Dieses Modell kann den pathologischen Prozess der menschlichen Silikose effizient, bequem und flexibel mit hoher Wiederholbarkeit und Wirtschaftlichkeit nachahmen.

Zusammenfassung

Silikose kann durch die Exposition gegenüber respiratorischem kristallinem Quarzstaub (CSD) in einer industriellen Umgebung verursacht werden. Die Pathophysiologie, das Screening und die Behandlung von Silikose beim Menschen wurden alle ausführlich mit dem Maus-Silikose-Modell untersucht. Indem sie Mäuse wiederholt dazu bringen, CSD in ihre Lunge einzuatmen, können die Mäuse die klinischen Symptome der menschlichen Silikose nachahmen. Diese Methode ist praktisch und effizient in Bezug auf Zeit und Leistung und verursacht keine mechanischen Verletzungen der oberen Atemwege durch Operationen. Darüber hinaus kann dieses Modell den akuten/chronischen Transformationsprozess der Silikose erfolgreich nachahmen. Die wichtigsten Verfahren waren folgende: Das sterilisierte 1-5 μm CSD-Pulver wurde vollständig gemahlen, in Kochsalzlösung suspendiert und 30 min lang in einem Ultraschall-Wasserbad dispergiert. Mäuse unter Isofluran-induzierter Anästhesie wechselten für ca. 2 s von einer flachen, schnellen Atmung zu einer tiefen, langsamen Aspiration. Die Maus wurde in eine Handfläche gelegt, und die Daumenspitze berührte sanft den Lippenrand des Kiefers der Maus, um die Atemwege zu begradigen. Nach jedem Ausatmen atmeten die Mäuse die Kieselsäuresuspension tropfenweise durch ein Nasenloch ein und schlossen den Vorgang innerhalb von 4-8 s ab. Nachdem sich die Atmung der Mäuse stabilisiert hatte, wurde ihre Brust gestreichelt und gestreichelt, um zu verhindern, dass der eingeatmete CSD ausgehustet wird. Die Mäuse wurden dann in den Käfig zurückgebracht. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass dieses Modell CSD entlang der typischen physiologischen Passage winziger Partikel in die Lunge von den oberen Atemwegen zu den terminalen Bronchiolen und Alveolen quantifizieren kann. Es kann auch die wiederkehrende Exposition von Mitarbeitern aufgrund der Arbeit replizieren. Das Modell kann von einer Person durchgeführt werden und benötigt keine teure Ausrüstung. Es simuliert bequem und effektiv die Krankheitsmerkmale der menschlichen Silikose mit hoher Wiederholbarkeit.

Einleitung

Arbeiter sind unweigerlich unregelmäßigem kristallinem Quarzstaub (CSD) ausgesetzt, der eingeatmet werden kann und in zahlreichen beruflichen Kontexten giftiger ist, darunter Bergbau, Töpferei, Glas, Quarzverarbeitung und Beton 1,2. Eine chronische Staubinhalation, die als Silikose bekannt ist, verursacht eine fortschreitende Lungenfibrose3. Epidemiologischen Daten zufolge ist die Inzidenz von Silikose in den letzten Jahrzehnten weltweit zurückgegangen, aber in den letzten Jahren hat sie zugenommen und betrifft jüngere Menschen 4,5,6<....

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Protokoll

Alle Verfahren folgten den Richtlinien des National Institutes of Health's Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH-Veröffentlichung Nr. 8023, überarbeitet 1978) und wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee an der Medizinischen Fakultät der Anhui University of Science and Technology genehmigt.

1. Mäuse managen und füttern

  1. Ordnen Sie 20 gesunde männliche C57BL/6-Mäuse in einem Verhältnis von 1:1 der Versuchs- oder Vehikelgruppe zu. Akklimatisieren Sie die Mäuse 1 Woche lang an die neue Umgebung.
  2. Sorgen Sie für eine konstante Lichtzeit von 12 h pro Tag. Verwenden Sie einen Zeitsc....

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Ergebnisse

Die potentielle Pathogenese der Silikose in Mäusen wurde mit der vorgeschlagenen Methode untersucht. Wir fanden heraus, dass das Körpergewicht der Mäuse in der Versuchsgruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe signifikant abnahm und dass sich das Körpergewicht nach Beendigung der Exposition langsam erholte. Aufgrund der hier verwendeten optimierten Dosis wurde in diesem Experiment keine Mortalität bei Kieselsäure-exponierten Mäusen beobachtet. Die technische Roadmap von wiederholtem Nasentropf zu CSD ist in (

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Diskussion

Silikose-Mausmodelle sind entscheidend für die Erforschung der Pathogenese und Behandlung der Silikose. Dieses Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Herstellung eines Modells der Silikose bei Mäusen durch wiederholte nasale Exposition. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung der pathologischen Merkmale der Silikose, die durch unterschiedliche Expositionszeiten induziert wird. Die Mäuse wurden an einem Beatmungsgerät betäubt und ihre Atemfrequenz wurde überwacht. Die anfängliche kurze, schnelle Atemfrequenz verlangsamt.......

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Offenlegungen

Die Autoren erklären, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

Danksagungen

Diese Studie wurde vom University Synergy Innovation Program der Provinz Anhui (GXXT-2021-077) und dem Anhui University of Science and Technology Graduate Innovation Fund (2021CX2120) unterstützt.

....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
0,5 mL RöhrchenBiosharpBS-05-M
10% Formalin neutrales FixiermittelNanchang Yulu Experimental Equipment Co.
Adobe IllustratorAdobe 
Alkohol DesinfektionsmittelXintai Kanyuan Desinfektionsprodukte Co.
CD68Abcamab125212
Citrat-Antigen-RückhollösungBiosharp Life ScienceBL619A
DAB Chromogenes KitNJJCBioW026-1-1
DimethylbenzolWest Asia Chemical Technology (Shandong) CoNA
Enhanced BCA Protein Assay KitBeyotime BiotechnologyP0009
Hämatoxylin und Eosin (H& E)Beyotime BiotechnologyC0105S HRP-Substrat
Millipore CorporationP90720
HRP-konjugiertes Affinipure Ziege Anti-Kaninchen IgG(H+L)ProteintechSa00001-2
EisessigsäureWest Asia Chemical Technology (Shandong) CoNA
ImageJNIHNA
IsofluranRWD Leben ScienceR510-22
Masson's Trichrome BeizsetSolarbioG1340
MethanolMacklinNA
MikroröhrchenMilliporeAXYMCT150CS
NF-κ B p65Cell Signaling Technology8242S
Oszillatorisches thermostatisches MetallbadAbsonNA
Paraffin-EinbettungsmaschinePrecision (Changzhou) Medical Equipment Co.PBM-A
ParaffinschneiderJinhua Kratai Instruments Co.
NA-Phosphat-Puffer (PBS)BiosharpBL601A
Physiologische KochsalzlösungDas erste Volkskrankenhaus der Stadt HuainanNA
PipettenEppendorfNA
PMSFBeyotime BiotechnologischesST505
PolarisationslichtmikroskopOlympusBX51
PräzisionswaageAcculabALC-110.4
Prism7.0GraphPad Version 7.0
PVDF-MembranenMillipore3010040001
RIPA LysepufferBeyotime BiotechnologieP0013B
RODI IOT intelligentes multifunktionales WasseraufbereitungssystemRSJRODI-220BN
Scilogex SK-D1807-E 3D-ShakerScilogexNA
SDS-PAGE GelvorbereitungskitBeyotime BiotechnologieP0012A
SiliziumdioxidSigma#BCBV6865
Sirius RotfärbungNanjing SenBeiJia Biological Technology Co., Ltd.
Anästhesiegerät für KleintiereAnhui Yaokun Biotech Co., Ltd.ZL-04A
Universal-Pipettenspitzen (0,1– 10 & Mikro; L)KIRGENKG1011
Universal-Pipettenspitzen (100– 1000 &Mikro; L)KIRGENKG1313
Universal-Pipettenspitzen (1– 200 & Mikro; L)KIRGENKG1212
Vortex  Mischer VWRNA
ZEISS GeminiSEM 500Zeiss GermanySEM 500
β-AktinBiossbs-0061R
NANANA181012

Referenzen

  1. Olsson, A., Kromhout, H. Occupational cancer burden: the contribution of exposure to process-generated substances at the workplace. Molecular Oncology. 15 (3), 753-763 (2021).
  2. The Lancet Respiratory. The world is failing on silicosis. The Lanc....

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Nachdrucke und Genehmigungen

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