Dieses Protokoll beschreibt eine mehrfarbige Immunfluoreszenztechnik zur Evaluierung des Rattenmodells der allergischen Rhinitis.
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Methodenartikel
Immunfluoreszenz-Markierung in Nasenschleimhaut-Gewebeschnitten von Ratten mit allergischer Rhinitis mittels Multicolor-Immunoassay
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Allergische Rhinitis (AR) ist eine chronische, nicht-infektiöse entzündliche Erkrankung der Nasenschleimhaut, die hauptsächlich durch spezifisches Immunglobulin E (IgE) vermittelt wird und etwa 10%-20% der Weltbevölkerung betrifft. Während die Immunfluoreszenzfärbung (IF) seit langem eine Standardtechnik zum Nachweis der krankheitsspezifischen Proteinexpression ist, sind herkömmliche IF-Techniken nur begrenzt in der Lage, die Expressionsniveaus von drei oder mehr Proteinen in derselben Probe nachzuweisen. Folglich wurden in den letzten Jahren mehrfarbige IF-Techniken entwickelt, die die gleichzeitige Markierung mehrerer Ziele in Zellen oder Geweben ermöglichen.
Dieses Protokoll bietet einen umfassenden Überblick über den Prozess zur Etablierung eines Rattenmodells der AR, zur Gewinnung von Nasenschleimhautproben und zu den technischen Verfahren für die mehrfarbige Immunfluoreszenz. Alle Ratten in der AR-Gruppe zeigten typische Symptome wie Niesen, eine laufende Nase und eine juckende Nase, wobei die Verhaltensbeobachtungen ≥5 Punkte erreichten. Die Hämatoxylin- und Eosinfärbung (H&E) zeigte eine erhöhte Anzahl von Entzündungszellen und eine gestörte Integrität der Nasenschleimhaut in der AR-Gruppe. Die mehrfarbige Immunfluoreszenz (mIF) zeigte eine erhöhte Expression von RORγt und TICAM-1, während die Foxp3-Expression im Nasenschleimhautgewebe von AR-Ratten abnahm.
Einleitung
Die allergische Rhinitis (AR) ist eine chronische, nicht-infektiöse entzündliche Erkrankung der Nasenschleimhaut, die hauptsächlich durch spezifisches Immunglobulin E (IgE)1,2 vermittelt wird. Sie ist gekennzeichnet durch Symptome wie Niesen, laufende Nase, verstopfte Nase und Juckreiz in der Nase. Mit der Industrialisierung und Urbanisierung nimmt die Verbreitung von AR allmählich zu und betrifft etwa 10 % bis 20 % der Weltbevölkerung1. Die Immunfluoreszenztechnik (IF) ist eine Fluoreszenzfärbemethode, bei der eine Antikörper-Antigen-Bindungsreaktion verwendet wird. Es kann eingesetzt ....
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Protokoll
Das Versuchsprotokoll und die Verfahren wurden vom Verwaltungs- und Tierforschungsausschuss der Chengdu University of Traditional Chinese Medicine genehmigt (Datensatznummer: 2022DL-010). Acht Wochen alte männliche Sprague Dawley (SD)-Ratten mit einem Gewicht von 180-200 g wurden kommerziell gewonnen (siehe Materialtabelle) und unter einem natürlichen Hell-Dunkel-Zyklus mit kontrollierter Temperatur (23 ± 2 °C) und relativer Luftfeuchtigkeit (55 % ± 10 %) gehalten. Zwölf Ratten wurden nach dem Zufallsprinzip in zwei Gruppen eingeteilt: die Kontrollgruppe und die AR-Gruppe. Alle Ratten wurden an diese Bedingungen gewöhnt und erhielten vor dem Versuch e....
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Ergebnisse
Sechs SD-Ratten wurden erfolgreich durch intraperitoneale OVA-Injektion und nasale Provokation in das AR-Modell induziert. AR wurde bei allen Ratten in der AR-Gruppe induziert, was 100% der Gruppe ausmachte. Alle Ratten in der AR-Gruppe zeigten typische Symptome wie Niesen, eine laufende Nase und eine juckende Nase. Alle Verhaltensbeobachtungen wurden mit ≥5 Punkten bewertet (Tabelle 2).
Die Ergebnisse der H&E-Färbung am 21. Tag der Modellierung zeigten, dass be.......
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Diskussion
Die allergische Rhinitis (AR) ist eine nicht-infektiöse entzündliche Erkrankung der Nasenschleimhaut, die durch eine Kombination von Umwelt- und genetischen Faktoren entsteht. Es ist zu einem globalen Gesundheitsproblem geworden, das sich auf die Arbeitseffizienz auswirkt, die Lebensqualität verringert, den Schlaf und die kognitiven Funktionen beeinträchtigt und Reizbarkeit und Müdigkeit verursacht. AR betrifft 10 % bis 20 % der Weltbevölkerung¹ und verursacht erhebliche wirtschaftliche Kosten, die in den EU-Ländern jähr.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts zu verraten.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde vom Ministerium für Wissenschaft und Technologie der Provinz Sichuan unterstützt (2021YJ0175).
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Al(OH)3 | Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd | A7130 | |
| 75% Ethanol | Anhui Yiren An Co., Ltd | 20210107 | |
| Ammoniak | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2021070101 | |
| wasserfreies Ethanol | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022070501 | |
| Anti-Fluoreszenz-Quenching-Versiegelung | SouthernBiotech | 0100-01 | |
| Automatische Färbemaschine | Thermo scientific | Varistain Gemini ES | |
| Carrier slides | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd | 220518001 | |
| Citrat-Phosphat-Puffer | Servicebio biotechnology co., Ltd | G1201 | |
| Zitronensäure-Antigen-Reparaturlösung (PH 6.0) | Xavier Biotechnology Co., Ltd | G1201 | |
| Deckglas | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co. | ||
| Deckglas | Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd | CS01-2450 | |
| CY3-Tyramide | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1223-50UL | |
| DAPI | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1012 | |
| Entfärbungsschüttler | SCILOGEX | S1010E | |
| EDTA Entkalkungslösung | Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd | ||
| Elektrischer Heizstrahltrockner | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
| Einbettungsbox-Markiermaschine | Thermo Scientific | PrintMate AS | |
| Einbettungsmaschine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | |
| Schnelle Gewebeentwässerungsmaschine | Thermo scientific | STP420 ES | |
| Filmversiegeler | Thermo scientific | Autostainer 360 | |
| FITC-Tyramide | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1222-50UL | |
| Fluoreszenzmikroskop | Sunny Optische Technologie Co.Ltd | CX40 | |
| Foxp3 | Affinity Biosciences Co., Ltd | bs-10211R | |
| Gefriertisch | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
| Ziege Anti-Kaninchen IgG H& L (HRP) | Liankebio Co., Ltd | GAR0072 | |
| Ziegenserum | Biosharp | BL210A | |
| H& E Färbeset | Leagene | DH0020 | |
| Hämostatische Pinzette | Shanghai Medical Devices Co., Ltd | J31010 | |
| Salzsäure | Sichuan Xilong Science Co., Ltd | 210608 | |
| Immunhistochemischer Stift | Biosharp | BC004 | |
| Mikrowellenherd | Midea M1-L213B | ||
| Neutrales Gummi | Sinopharm Group Chemisches Reagenz Co., Ltd | 10004160 | |
| Ovalbumin | Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd | A804010 | |
| Oven | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
| Palmzentrifuge | SCILOGEX | D1008E | |
| Paraformaldehyd | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P0099-100ml | |
| Pathologischer Schnittscanner | 3DHISTECH Kft | Pannoramic SCAN | |
| PBS Puffer | Biosharp | G4202 | |
| Pipette | Dragon | KE0003087/KA0056573 | |
| Rorγ t | Affinity Biosciences Co., Ltd | DF3196 | |
| Scalpel | Quanzhou Excellence Medical Co., Ltd | 20170022 | |
| Selbstfluoreszierendes Löschmittel Sudan Black B | Bioengineering Co., Ltd | A602008-0025 | |
| Schneidemaschine | Thermo scientific | HM325 | |
| Schneidemaschine | Thermo scientific | HM325 | |
| Slide | Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd | PC2-301 | |
| Sprague Dawley Ratten | Sichuan Akademie für Traditionelle Chinesische Medizin | SYX  2023-0100 | |
| TICAM-1 | Affinity Biosciences Co., Ltd | DF6289 | |
| Gewebeschere | Shanghai Medical Devices Co., Ltd | J22120 | |
| Gewebespreader-Backblechmaschine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
| TYR-690 Fluoreszenzfarbstoffe | Shanghai Rutron Biotechnology Co., Ltd | RC0086-34RM | |
| Wirbelmischer | SCILOGEX | SLK-O3000-S | |
| Wasserbad-Schiebetrockner | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
| Wachsschneider | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JXL-818 | |
| Xylole | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022051901 |
Referenzen
- Brożek, J. L., et al. Allergic rhinitis and its impact on asthma (ARIA) Guidelines-2016 revision. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 140 (4), 950-958 (2017).
- Maurer, M., Zuberbier, T. Und....
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Nachdrucke und Genehmigungen
