Génération efficace de hiPSC neurones Lineage Reporters Knockin spécifique en utilisant l'CRISPR / Cas9 et Cas9 Système Double Nickase

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28 mai 2015

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Les outils d’édition du génome tels que le système CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)/Cas (associé à CRISPR) ont considérablement amélioré l’efficacité du ciblage génique dans les cellules souches pluripotentes induites humaines (hiPSC). Ce manuscrit décrit un protocole permettant de générer un rapporteur hiPSC spécifique à la lignée à l’aide de la recombinaison homologue assistée par le système CRISPR/Cas.

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Génération de rapporteurs knock-in

Chapters in this video

0:05

Titre

1:54

Conception des vecteurs de ciblage

2:41

Conception et construction vectorielle des sgRNA pour le système CRISPR/Cas9

5:20

Conception et construction de sgRNA pour la double nickase Cas9n

8:06

Évaluation des sgRNA par l'endonucléase T7 1

11:03

Prédiction in silico des sites hors cible potentiels

12:32

Résultats : le test T7E1 est utilisé pour évaluer les sgRNA avant la transfection des hiPSC

13:56

Conclusion

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