Transarteriosa somministrazione di oncolitici virus per locoregionale Terapia delle ortotopico HCC in Rats

L'obiettivo generale di questo intervento chirurgico è quello di somministrare la terapia con virus oncolitici locoregionali tramite somministrazione arteriosa epatica al carcinoma epatocellulare ortotopico o alle lesioni HCC. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo dei virus oncolitici, come ad esempio qual è l'eticità della terapia applicata locoregionale per il trattamento dell'HCC ortotopico? Il vantaggio principale di questa tecnica è che consente la somministrazione di titoli elevati di virus oncolitico a più lesioni HCC.

Una limitazione della somministrazione intratumorale o sistemica. Questa tecnica imita l'applicazione della chemioembolizzazione transarteriosa. Lo standard di cura per molti pazienti con HCC consente un'eccellente traduzione dei dati preclinici.

Prima di iniziare l'intervento, indossare gli appositi dispositivi di protezione individuale e disinfettare l'area chirurgica e le attrezzature con etanolo al 70%. Diluire il virus alla concentrazione appropriata, in base alla tossicità del virus e alla suscettibilità del ceppo di ratto utilizzato. Quindi pre-riempire le siringhe da un millilitro con il virus diluito e dotare le siringhe di aghi da 30 gauge, avendo cura di rimuovere eventuali bolle.

Confermare che il ratto è completamente sedato a causa della mancanza di risposta al pizzicamento del poggiapiedi. Usando un piccolo bisturi curvo, praticare una piccola incisione verticale nella pelle, direttamente lungo la linea mediana, ed estendere l'apertura fino al processo xifoideo. Successivamente, incidere lo strato muscolare allo stesso modo, facendo attenzione a non perforare gli organi della cavità addominale.

Posiziona un divaricatore sull'addome per allargare il muscolo e la pelle, esponendo l'intera area addominale. Quindi inumidire due tamponi di garza da 7,5 x 7,5 centimetri con soluzione fisiologica e stendere una garza sulla parte superiore dell'apertura chirurgica e una sul fondo. Per isolare l'arteria epatica, utilizzare prima due tamponi applicatori di cotone inumidito per trasferire delicatamente l'intestino e il cieco fuori dalla cavità addominale sul tampone di garza inferiore, piegando la garza sugli organi per mantenerli umidi.

Quindi, solleva delicatamente e capovolgi il lobo epatico laterale sinistro sulla garza superiore e usa un piccolo paio di forbici a molla per tagliare la membrana fibrosa sul lato inferiore del lobo. Piega la garza sul lobo per tenerla in posizione. Quindi, utilizzando un microscopio da dissezione e una pinza fine, sezionare la sottile membrana che circonda il lobo caudato interno e capovolgere il lobo sulla garza superiore.

Posizionare il lobo caudato interno sotto la piega di garza con il lobo laterale sinistro, quindi sezionare il lobo caudato posteriore allo stesso modo. Dopo aver posizionato il lobo caudato posteriore sotto la garza, localizzare l'arteria epatica comune in base alla sua forte pulsazione. Seguendo l'arteria verso l'anatomia destra, utilizzare una pinza sottile per rimuovere il tessuto membranoso spesso che oscura le arterie gastroduodenali e epatiche corrette.

Ferma qualsiasi sanguinamento con un applicatore di cotone. Quindi utilizzare due pinze sottili e atraumatiche per sezionare attentamente le arterie gastroduodenali epatiche comuni e le arterie epatiche corrette dalle membrane circostanti. Per iniettare l'arteria epatica, in primo luogo, passare una sutura di prolene 7-0 sotto l'arteria gastroduodenale e utilizzare un micro porta aghi per legare una legatura permanente all'estremità distale dell'arteria appena sopra la biforcazione, lasciando circa due pollici di materiale di sutura su ciascuna estremità.

Quindi, posiziona un piccolo morsetto sull'arteria epatica comune per bloccare temporaneamente il flusso sanguigno. Entro cinque minuti dal posizionamento del morsetto, aumentare l'ingrandimento fino a quando l'arteria gastroduodenale non è a fuoco e appare abbastanza grande da inserire con precisione l'ago. Quindi posizionare l'ago della siringa per iniezione nel lume dell'arteria gastroduodenale e premere lentamente lo stantuffo per massimizzare l'efficienza di trasduzione.

Quando l'intero volume di iniezione è stato somministrato, ritrarre lentamente l'ago dall'arteria e far passare una seconda sutura di prolene 7-0 sotto l'arteria gastroduodenale. Legare una seconda legatura permanente sopra il sito di iniezione e rimuovere il morsetto dall'arteria epatica comune. Verificare che il flusso sanguigno attraverso l'arteria epatica corretta verso il fegato sia stato ripristinato e tagliare le estremità libere delle legature.

Verificare che non vi siano emorragie interne. Quindi riportare i tessuti esternalizzati nella cavità addominale. Utilizzando il vicryl 4-0 e un ago curvo, suturare il muscolo e la pelle in strati separati con suture continue a circa un millimetro di distanza.

Quindi monitorare l'animale fino a quando non si è completamente ripreso. La cinetica della replicazione intratumorale del virus è virus-dipendente. Ad esempio, la replicazione del virus della stomatite vescicolare raggiunge il picco entro un giorno dall'iniezione.

Con numerosi focolai virali, un genitore esclusivamente all'interno dei noduli di carcinoma epatocellulare degli animali iniettati. Al contrario, il virus della malattia di Newcastle mostra una cinetica di replicazione virale prolungata, con picchi di titoli virali il quinto giorno dopo l'iniezione. A causa della specificità tumorale intrinseca dei virus, l'agente patogeno viene rapidamente eliminato dal normale tessuto epatico circostante.

Inoltre, l'analisi morfometrica dei noduli tumorali trattati con vettori di stomatite vescicolare selezionati casualmente dimostra che l'efficienza della trasduzione tumorale non è correlata alle dimensioni del tumore. La somministrazione arteriosa transepatica di una microsfera di amido degradabile, in concomitanza con la soluzione virale, determina un'embolizzazione quasi completa dei noduli tumorali, imponendo un effetto minimo sulla profusione del tessuto epatico normale. Come ulteriormente dimostrato da queste immagini di risonanza magnetica con contrasto dinamico che utilizzano un mezzo di contrasto al gadolinio.

Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere completata in 20 minuti, se eseguita correttamente. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di avere tutto preparato prima di somministrare l'antesia, per ridurre al minimo il tempo necessario per l'intervento. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come sezionare l'arteria epatica e prepararla per l'iniezione di soluzioni di virus oncolitici per la terapia locoregionale dell'HCC.

Non dimenticare che lavorare con i virus può essere estremamente pericoloso e che durante l'esecuzione di questa procedura è necessario prendere sempre precauzioni, come indossare indumenti protettivi individuali e disinfettare adeguatamente l'area di lavoro e gli strumenti.