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酿酒酵母4-硫尿嘧啶代谢标记及新合成 mRNA 作为 RNA 聚合酶 II. 活性的一种代理
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Saccharomyces cerevisiae Metabolic Labeling with 4-thiouracil and the Quantification of Newly Synthesized mRNA As a Proxy for RNA Polymerase II Activity
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酿酒酵母4-硫尿嘧啶代谢标记及新合成 mRNA 作为 RNA 聚合酶 II. 活性的一种代理

DOI:
10.3791/57982-v

•

09:21 min

•

October 22, 2018

•

,
1Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire, Illkirch, France, 2Centre National de la Recherche Scientifique, Illkirch, France, 3Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, Illkirch, France, 4Université de Strasbourg

Kapitel

  • 00:04Titel
  • 00:41Cell Culturing
  • 01:374tU Labeling with S. pombe as a Spike-in
  • 03:20RNA Extraction and DNase Treatment
  • 04:30Thiol-specific Biotinylation of Newly Synthesized RNA
  • 06:05Purification of Newly Synthesized Fraction from Total and Unlabeled RNA Using Streptavidin-coated Magnetic Beads
  • 07:18Results: Quantification of Newly Synthesized mRNA as a Proxy for RNA Polymerase II Activity
  • 08:52Conclusion

Summary

Automatische Übersetzung

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这里描述的协议是基于全基因组的定量的新合成的 mRNA 纯化的酵母细胞标记为 4-硫尿嘧啶。这种方法允许测量 mrna 合成与 mrna 衰变分离, 从而提供了 RNA 聚合酶 II 转录的精确测量。

Tags

Saccharomyces CerevisiaeMetabolic Labeling4-thiouracilQuantificationNewly Synthesized MRNARNA Polymerase II ActivityMicroarray HybridizationHigh-throughput SequencingS. PombeYPD MediumYAS MediumCell CountingCell CentrifugationRNA ExtractionRNA Polymerase II

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