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酿酒酵母
4-硫尿嘧啶代谢标记及新合成 mRNA 作为 RNA 聚合酶 II. 活性的一种代理
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Saccharomyces cerevisiae
Metabolic Labeling with 4-thiouracil and the Quantification of Newly Synthesized mRNA As a Proxy for RNA Polymerase II Activity
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Click here for the English version.
酿酒酵母
4-硫尿嘧啶代谢标记及新合成 mRNA 作为 RNA 聚合酶 II. 活性的一种代理
DOI:
10.3791/57982-v
•
09:21 min
•
October 22, 2018
•
Tiago Baptista
2,3,4
,
Didier Devys
2,3,4
1
Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire, Illkirch, France
,
2
Centre National de la Recherche Scientifique, Illkirch, France
,
3
Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, Illkirch, France
,
4
Université de Strasbourg
Kapitel
00:04
Titel
00:41
Cell Culturing
01:37
4tU Labeling with
S. pombe
as a Spike-in
03:20
RNA Extraction and DNase Treatment
04:30
Thiol-specific Biotinylation of Newly Synthesized RNA
06:05
Purification of Newly Synthesized Fraction from Total and Unlabeled RNA Using Streptavidin-coated Magnetic Beads
07:18
Results: Quantification of Newly Synthesized mRNA as a Proxy for RNA Polymerase II Activity
08:52
Conclusion
Summary
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这里描述的协议是基于全基因组的定量的新合成的 mRNA 纯化的酵母细胞标记为 4-硫尿嘧啶。这种方法允许测量 mrna 合成与 mrna 衰变分离, 从而提供了 RNA 聚合酶 II 转录的精确测量。
Tags
Saccharomyces Cerevisiae
Metabolic Labeling
4-thiouracil
Quantification
Newly Synthesized MRNA
RNA Polymerase II Activity
Microarray Hybridization
High-throughput Sequencing
S. Pombe
YPD Medium
YAS Medium
Cell Counting
Cell Centrifugation
RNA Extraction
RNA Polymerase II
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