Amperometric 전극 제작

Summary

이 프로토콜은 탄소 섬유 전극을 생성하는 방법에 대해 설명합니다. 전극은 이후 탄소 섬유 amperometry와 vesicles에서 카테 릴리스를 감지하는 데 사용됩니다.

Abstract

탄소 섬유 전극 amperometry 측정 단일 세포의 vesicles에서 카테 릴리스의 검출을위한 열쇠입니다. 여기, 우리는 낮은 잡음 (<0.5 PA) 전극을 생성하는 데 필요한 기술을 설명합니다. 기술은 이전의 연구 (1,2)에 의해 출판 설명에서 수정되었습니다. 전극은 탄소 섬유를 준비하고 섬유 대기음하는 필터와 진공을 사용하여 각각의 모세관에 개별적으로 그들을 스레딩에 의해 만들어집니다. 다음, 섬유와 모세관은 미세 뾰족한 끝 두 개의 반쪽 각을 만들고, 전극 풀러에 의해 가져온 것입니다. 전극은 에폭시 – 유리 밀봉을 만드는 경화제와 혼합 뜨거운 액체 에폭시에 담근 수 있습니다. 마지막으로, 전극은 에폭시를 치료하기 위해 오븐에 배치됩니다. 전극주의 처리들은 지속적으로 손상없이되는 것을 보장하기 위해 중요합니다. 이 프로토콜은 단일 세포에서 녹음 amperometric 전극을 조작하고 절단하는 방법을 보여줍니다.

Protocol

1 부 : 탄소 섬유 준비 모세관 피펫의 ~ 1.25은 X 길이 길이의 탄소 섬유의 번들 (우리가 7μm 직경을 사용) 잘라요. 비등하여 사이징을 제거 ~ 100 용기에 아세톤의 ML 30 분 이상 뜨거운, 끓는 아세톤에 섬유를 추가합니다. 따뜻한 아세톤에서 섬유를 제거하고, 신선한 아세톤의 50-100 ML과 깨끗한 비커로 전송할 수 있습니다. 오픈 150mm 페트리 접시에있는 번들을 배치하고 aird…

Discussion

이 프로토콜은 amperometric 전극을 생성하고 절단하는 방법을 설명합니다. amperometric 녹음하는 동안, 탄소 섬유 전극은 분비 세포의 표면에 대해 배치됩니다. Exocytotic 활동 catecholamines의 산화 후 전자의 양도로 인한 전기 전류를 나타냅니다 amperometric 스파이크로 관찰됩니다. 연습이 만들고 amperometric 전극을 가공으로 소음이 크게 상용 전극의 많은 이상 향상시킬 수 있습니다.

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Epoxy Hardener 1,3-phenylene-diamene flakes	Reagent	Sigma Aldrich	P23954-100G04 716AJ	Aliquots are stored in a dessicator and should not be exposed to light.
Carbon Fibers	Material	Goodfellow	C005725
Micro-Hematocrit Capillary Tubes	Material	Fisher	NC9836768
Epoxy Resin	Reagent	Miller-Stephenson	Epon Resin 828
Dissecting Microscope	Instrument
Electrode Puller	Instrument	Narishige Japan	PP-830	1st pull = 24.8 degrees C; 2nd pull = 62.7 degrees C
Oven	Instrument			set to 100 degrees F.
Hot plate	Instrument			set to 55 degrees C