פורסים הכנה אופקי של הרשתית
Summary
באופן מסורתי פרוסה האנכי והכנת כל הר של הרשתית שימשו ללימוד פונקציה של מעגלים הרשתית. כאן, אנו מתארים את הרומן חיתוך שיטה לשמר את המורפולוגיה הדנדריטים של נוירונים ברשתית ללא פגע.
Abstract
באופן מסורתי פרוסה האנכי והכנת כל הר של הרשתית שימשו ללימוד פונקציה של מעגלים הרשתית. עם זאת, רבים של נוירונים ברשתית, כגון תאים amacrine, להרחיב הדנדריטים שלהם בצורה אופקית, כך מורפולוגיה של תאים אמור להינזק קשות פרוסות אנכי. לקראת כל הר, במיוחד עבור תיקון-clamp הקלטות, הנוירונים ברשתית בשכבת הביניים אינם נגישים בקלות בשל הסיקור הנרחב של גליה (תאים מולר) endfeets של התא. כאן, אנו מתארים את הרומן חיתוך שיטה לשמר את המורפולוגיה הדנדריטים של נוירונים ברשתית ללא פגע. פרוסה נעשתה אופקית על השכבה הפנימית של הרשתית באמצעות מבצעה vibratome אחרי הרשתית היה מוטבע נמוכה טמפרטורת ההתכה agarose ג'ל. בהכנה זו פרוסה האופקי של הרשתית, למדנו את תפקוד הנוירונים ברשתית בהשוואה המורפולוגיה שלהם, באמצעות תיקון-clamp הקלטה, טכניקת הדמיה סידן, immunocytochemistry, ואת תא בודד RT-PCR.
Protocol
Discussion
ישנם מספר יתרונות חשובים של הכנת החתך האופקי של הרשתית.
ראשית, מורפולוגיה של תאים דנדריטים להרחיב את אופקי, כגון תאים amacrine תאים אופקיים, נשמר. הוכח כי קיימים מעל 20 סוגים של תאים amacrine ברשתית (מקניל ו Masland, 1998), ולכן חשוב מאוד להשוות את המורפולוגיה של התאים ע…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו מודים בני הזוג. Richard H. Masland ו Akimichi Kaneko שנתן לנו עצות ערך והצעות להקים את הליך הכנת הפרוסה האופקי של הרשתית.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Sigma | A-1296 | ||
| Agarose L | Wako | 317-01182 | Low-temperature melting agarose | |
| Hyaluronidase | Sigma | Type I-S, 300 units/mg | ||
| Medium | in mM: 102 NaCl, 3.1 KCl, 2.0 CaCl2, 1.0 MgCl2, 23 NaHCO3, and 10 glucose, maintained at pH 7.8, or, Ames’ Solution (Sigma) | |||
| Microwave | ||||
| Hot water bath | 35 C | |||
| Vibratome slicer | Leica | VT1000S | ||
| MF-Membrane filters | Millipore | HAWP01300 | Filter paper , pore size 0.45 um | |
| Dissection tools | forceps, blade, pinch, twizzer, etc. | |||
| Instant glue | eg., Alonalpha, Krazy Glu | |||
| 50 ml syringe | ||||
| syringe filter | Millipore | SX0001300 |
Referencias
- Azuma, T., Enoki, R., Iwamuro, K., Kaneko, A., Koizumi, A., Koizumi, A., TC, J. a. k. o. b. s., Masland, R. H., MA, M. a. c. N. e. i. l., RH, M. a. s. l. a. n. d. Multiple spatiotemporal patterns of dendritic Ca2+ signals in goldfish retinal amacrine cells. Brain Res. , 64-73 (2004).
