A los protocolos de un sistema de cerebro de rata embrionaria cultura global se describe. Progenitoras multipotentes en los agregados pueden desarrollarse y diferenciarse en neuronas, astrocitos y oligodendrocitos.
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Artículo de método
Preparación de las Culturas Rata total del cerebro de las neuronas y la glía de Estudios para el Desarrollo
En este artículo
Resumen
Resumen
Un sistema in vitro que recapitula el desarrollo y diferenciación de células progenitoras en neuronas maduras y células gliales en el sistema nervioso central (SNC) que proporcionan una poderosa plataforma para los neurocientíficos para investigar axo-glial interacciones, propiedades y la diferenciación de células progenitoras multipotentes, y la progresión de oligodendroglial células de linaje en el nivel celular y molecular. Se describe aquí un total de SNC sistema de cultivo de prosencéfalos embrionario de la rata, que puede ser mantenido en un medio libre de suero hasta 3-4 semanas y se utiliza en nuestro laboratorio como un modelo para estudiar las neuronas-glia la interacción y la mielinización del SNC. Este video clip se mostrará cómo aislar y cultivar estas culturas agregada del SNC de cerebro de rata E16. Además, a partir de la disección del cerebro mismo, altamente enriquecido regulares cultivos de neuronas disociadas se pueden obtener fácilmente y se utiliza para diversos estudios sobre las neuronas del SNC o utilizados para co-cultivos con otras células.
Protocolo
Preparación antes de la disección
Instrumentos quirúrgicos: esterilizar todos tijeras y pinzas de disección por autoclave
Cubreobjetos de limpieza:
- Ponga todos los cubreobjetos (15 mm de diámetro por 24 y placa) en el vaso 1 litro de hierba en el 33% de HCl por lo menos 24 h
- Lavar con agua corriente durante 10 minutos con un movimiento de vez en cuando para eliminar todo residuo de HCl
- Enjuague con agua Millipore
- Drenar el agua
- Remoje cubreobjetos en el 95-98% de etanol
- Cubreobjetos traslado a un paño limpio sobre una placa plana y ....
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Discusión
Los primeros estudios informó la formación de sinapsis y de la mielina madura libre mediada la rotación de cultivos de agregados flotantes 1. El agregado del SNC sistema de cultivo se describe aquí se combina el suero libre de crecimiento de las células progenitoras multipotentes en tres dimensiones con los agregados de la comodidad de las culturas tradicionales en 2D para facilitar el análisis de desarrollo de las células, la migración y la diferenciación in vitro. El sistema puede ser modificado y .......
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Agradecimientos
Este estudio fue financiado en parte por los fondos iniciales de la Texas A & M University
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Referencias
- Matthieu, J. M. Myelination in rat brain aggregating cell cultures. Neuroscience. 3, 565-56 (1978).
- Chen, Y. ing Isolation and culture of rat and mouse oligodendrocyte precursor cells. Nat. Protocols. 2, 1044-10 (2007).
- Watkins, T. A., Emery, B., Mulinyawe....
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