Denaturing polyacrylamide דשן ג'ל אלקטרופורזה (עמוד דשן)
Summary
Denaturing polyacrylamide אוריאה ג'ל אלקטרופורזה משמשת נפרד חד גדילי דנ"א או רנ"א עד לגבול של 500 נוקלאוטידים. אוראה בשילוב עם denatures דגימות חום גדילי יחיד מובנה נודדים בתוך המטריצה ג'ל לפי משקל מולקולרי שלהם.
Abstract
PAGE דשן או denaturing polyacrylamide אוריאה ג'ל אלקטרופורזה מעסיקה 6-8 אוריאה M, אשר denatures DNA משני מבנים או RNA, והוא משמש להפרדה שלהם במטריצה polyacrylamide ג'ל על בסיס משקל מולקולרי. שברים בין 2-500 בסיסים, עם הבדלי אורך קטנים כמו נוקלאוטיד יחיד, ניתן להפריד בשיטה זו: 1. ההגירה של המדגם תלוי בריכוז acrylamide הנבחר. אחוז גבוה יותר של polyacrylamide פותר שברי משקל מולקולרי נמוך. השילוב של אוריאה וטמפרטורות של 45-55 מעלות צלזיוס בזמן הריצה ג'ל מאפשר להפריד את ה-DNA לא מובנים או מולקולות RNA.
באופן כללי שיטה זו נדרש לנתח או לטהר גדילי דנ"א בודדות או קטעי RNA, כמו oligonucleotides או מוצרים מסונתז או תווית של תגובות אנזימטיות מחשוף.
במאמר זה אנו מציגים וידאו כיצד להכין ולהפעיל polyacrylamide ג'לים denaturing אוריאה. טיפים טכניים כלולים, בנוסף 1,2 הפרוטוקול המקורי.
Protocol
Discussion
- החדות הלהקה תלוי במספר גורמים. היקף המדגם טעון ללהקות חדה צריך להיות קטן ככל האפשר, כלומר באופן אידיאלי בין μl 1-5. עם זאת, עד 15 μl ניתן לטעון שעדיין מבטיח פתרון מקובל. פחות נפח דגימה תוצאות להקות חדות.
- איכות הלהקה תלוי גם בעובי ג'…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי המועצה למחקר האקדמי סינגפור (ARC) [מספר מענק 90/07]. אנו מודים Radiodurans על התמיכה.
Referencias
- Maniatis, T., Jeffrey, A., van deSande, H. Chain length determination of small double- and single-stranded DNA molecules by polyacrylamide gel electrophoresis. Bioquímica. 14, 3787-3794 (1975).
- Albright, L. M., Slatko, B. E. Denaturing polyacrylamide gel electrophoresis. Curr Protoc Nucleic Acid Chem. , (2001).
- . . PROTEAN II xi Cell and PROTEAN II xi 2-D Cell Instruction Manual. , (2001).
