Poliacrilamida electroforesis en gel de urea se utiliza para separar una sola cadena de ADN o ARN, hasta un límite de 500 nucleótidos. Urea en combinación con el calor desnaturaliza las muestras y no estructurados cadenas simples migrar dentro de la matriz de gel de acuerdo a su peso molecular.
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Artículo de método
Poliacrilamida electroforesis en gel de urea (urea PÁGINA)
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Resumen
Resumen
PÁGINA urea o desnaturalización de poliacrilamida electroforesis en gel de urea cuenta con 8.6 M de urea, lo que desnaturaliza el ADN o ARN estructuras secundarias y se utiliza para su separación en una matriz de gel de poliacrilamida en base al peso molecular. Fragmentos de entre 2 y 500 bases, con las diferencias de longitud tan pequeño como un solo nucleótido, pueden ser separados utilizando este método 1. La migración de la muestra depende de la concentración de acrilamida elegido. Un mayor porcentaje de poliacrilamida se resuelve fragmentos de menor peso molecular. La combinación de urea y temperaturas de 45-55 ° C durante la ejecución del gel permite la separación de ADN no estructurados o moléculas de ARN.
En general, este método es necesario para analizar o purificar el ADN de cadena sencilla o fragmentos de ARN, tales como los oligonucleótidos sintetizados o etiqueta o de los productos de las reacciones de escisión enzimática.
En este artículo de vídeo que muestran cómo preparar y ejecutar los geles de poliacrilamida desnaturalizantes urea. Consejos técnicos se incluyen, además de los 1,2 del protocolo original.
Protocolo
El protocolo de texto completo y detallado de este procedimiento experimental está disponible en los protocolos actuales en biología molecular. Detalladas paso a paso las instrucciones para el montaje del bocadillo de gel y gel para los aparatos se pueden encontrar en el sitio web BioRad 3.
Equipo necesario:
Placas de vidrio (interior y exterior)
10 cm de células: 10,1 x 7,3 cm (placa interior), 10,1 x 8,2 cm (la placa exterior), BioRad
20 cm de células: 20 x 20 cm (placa interior), 20 x 22,3 cm (placa exterior), BioRad
0.5-1.5 mm peine de gel y espaciadores
Gel de pie de fundición
Gel ....
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Discusión
- La nitidez de la banda depende de varios factores. El volumen de muestra cargada de bandas de fuerte debe ser lo más pequeña posible, es decir, lo ideal es entre 1.5 l. Sin embargo, hasta 15 l puede ser cargado que todavía asegura una resolución aceptable. Menos de resultados de la muestra de volumen en las bandas más nítida.
- La calidad de la banda también depende del grosor del gel. Diluyente geles, como por ejemplo 0,75 mm muestran mejores resultados que los geles 1,5 mm de espesor.
- La forma de las bandas también .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el consejo de investigación académica de Singapur (ARC) [número de concesión 90/07]. Damos las gracias por el apoyo radiodurans.
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Referencias
- Maniatis, T., Jeffrey, A., van deSande, H. Chain length determination of small double- and single-stranded DNA molecules by polyacrylamide gel electrophoresis. Biochemistry. 14, 3787-3794 (1975).
- Albright, L. M., Slatko, B. E. Denaturing polyacrylamide gel electrophoresis. Curr ....
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Reimpresiones y permisos
