Montaje, ajuste y uso de un microscopio de campo Apertureless de Infrarrojo Cercano para la imagen de proteínas

Resumen

El montaje de un microscopio de campo cercano infrarrojo de agregados de proteínas de imagen se describe.

Resumen

Este documento tiene como objetivo instruir al lector en el montaje y operación de un infrarrojo cercano microscopio de campo para obtener imágenes más allá del límite de difracción. El apertureless cerca de microscopio de campo es una dispersión de luz, tipo de instrumento que proporciona espectros infrarrojos a una resolución de alrededor de 20 nm. Una lista completa de componentes y un protocolo de paso a paso para su uso se proporciona. Errores comunes en el montaje y ajuste de instrumentos se discuten. Un conjunto de datos representativo que muestra la estructura secundaria de un amiloide fibrilar se presenta.

Protocolo

Antecedentes:

Apertureless sonda cerca de la microscopía de campo IR ofrece imágenes de alta resolución espacial. Es una técnica relativamente nueva en la que se dispersa un haz incidente de infrarrojos por un fuerte microscopía de fuerza atómica (AFM) de punta que oscila a la frecuencia de resonancia del cantilever cerca de la muestra. Un detector de infrarrojos recoge la luz dispersada y se demodula en esta frecuencia de resonancia o sus armónicos. De esta manera, la dispersión de fondo del incidente de rayo láser enfocado en el resto de la superficie de la muestra puede ser reducida y una resolución espacial mucho más allá del límite de ....