Deze video beschrijft een techniek om een enkel nematode snel te screenen op een genetische marker door PCR-screening. In het voorbeeldprotocol screenen we op CRISPR-gebaseerde genoombewerking.
Protocol
Het volgende protocol is een uittreksel uit Prior et al, A Rapid and Facile Pipeline for Generating Genomic Point Mutants in C. elegans Using CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins, J. Vis. Exp. (2018). Single Worm PCR en Genotypering Breng na 1 – 2 dagen leggen de F1s over in individuele PCR-stripbuisdoppen met 7 μL wormlysisbuffer met behulp van …
Representative Results
Figuur 1. CRISPR-Cas9 engineering van deC. eleganssod-1 locus. (A) Schematische illustratie die de exon-intronstructuur van de zode-1 locus in C. elegans afschildert. De rode balk geeft de locatie van G93 in exon 3 aan. De primer paar set wordt opgemerkt door de rode pijlen (F1-R1). (B) Sequentie uitlijning van…