迁移人T淋巴细胞分离，培养和分析<em在体外</em
Summary
T淋巴细胞的迁移过程中出现归巢淋巴器官，从血管中退出，进入周围组织。在这里，我们描述了一个可以用来分析T淋巴细胞迁移的协议<em>在体外</em>。
Abstract
T淋巴细胞的迁移涉及到与其他细胞或细胞外基质蛋白表达的配体的细胞表面整合的粘合剂的相互作用。从低亲和力状态激活在细胞前沿的高亲和力状态的精确时空的整合是很重要的T淋巴细胞迁移<sup> 1</sup>。同样，细胞后缘内陷，或uropod，是一个必要的步骤，保持持久的整合依赖的T淋巴细胞的活力<sup> 2</sup>。许多治疗方法，自身免疫性或炎症性疾病的目标整合为手段来抑制白细胞的过度招聘和迁移<sup> 3</sup>。要研究的分子事件，调节人体的T淋巴细胞迁移，我们利用<em>在体外</em>系统来分析一个两维的基板，模仿，T淋巴细胞从血管招聘过程中遇到的环境的细胞迁移。 T淋巴细胞是首次分离出器官捐献者，然后激发和培养七到十天。在实验中，T淋巴细胞是允许涂上间粘附分子1（ICAM – 1），LFA – 1整合的配体，基质细胞衍生因子-1（SDF – 1）基板上坚持和迁移。我们的数据表明，T淋巴细胞表现出〜15微米/分钟的迁徙速度。可以抑制T淋巴细胞的迁移整合封锁<sup> 1</sup>或抑制细胞的肌动球蛋白机械，调节细胞迁移<sup> 2</sup>。
Protocol
Discussion
在这个实验中，我们提供了一个简单的系统来分析初级人类T淋巴细胞的活力细节。体外迁移实验已用于解剖的许多分子和参与各种细胞类型的运动的信号转导通路的作用。要记住，从我们的协议设计自己的实验时，一些关键的控制包括：1）非粘性或不整合胶粘剂基材，如牛血清白蛋白（BSA）或聚左旋赖氨酸（PLL），涂料，分别为2 ）整合特定的封闭抗体治疗，无刺激信号，如SDF – 1在我们?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这个项目是由美国国立卫生赠款HL087088（MK）和HL18208（MK）的支持。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| RPMI 1640 | Gibco | 11875 | ||
| FBS | Thermo Scientific | SH300070.03 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| 1-Step Polymorphs | Accurate Chemical | AN221725 | ||
| PHA | Remel/Fisher Scientific | R30852801 | ||
| Rec. human IL-2 | R&D Systems | 202-IL | ||
| Rec. human IL-15 | R&D Systems | 247-IL | ||
| Protein G | Sigma Aldrich | 19459 | ||
| Rec. human ICAM-1/Fc | R&D Systems | 720-IC | ||
| Rec. human SDF-1 | R&D Systems | 350-NS |
Referencias
- Hyun, Y. M., Chung, H. L., McGrath, J. L., Waugh, R. E., Kim, M. Activated integrin VLA-4 localizes to the lamellipodia and mediates t cell migration on VCAM-1. J Immunol. 183, 359-369 (2009).
- Morin, N. A., Oakes, P. W., Hyun, Y. M., Lee, D., Chin, Y. E., King, M. R., Springer, T. A., Shimaoka, M., Tang, J. X., Reichner, J. S., Kim, M. Nonmuscle myosin heavy chain IIA mediates integrin LFA-1 de-adhesion during T lymphocyte migration. The Journal of experimental medicine. 205, 195-205 (2008).
- Hyun, Y. M., Lefort, C. T., Kim, M. Leukocyte integrins and their ligand interactions. Immunologic research. , (2009).
