La migración de los linfocitos T se produce durante la recalada de los órganos linfoides, la salida de la vasculatura, y entrar en los tejidos periféricos. Aquí se describe un protocolo que se puede utilizar para analizar la migración de los linfocitos T In vitro.
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Artículo de método
Aislamiento de linfocitos T humanos, cultura y análisis de la migración In Vitro
En este artículo
Resumen
Resumen
La migración de los linfocitos T implica la interacción adhesiva de las integrinas de la superficie celular con ligandos expresados en otras células o con proteínas de la matriz extracelular. La activación precisa espacio-temporal de las integrinas de un estado de baja afinidad a un estado de alta afinidad en el borde de la célula principal es importante para la migración de los linfocitos T
Protocolo
1. Aislamiento de linfocitos T humanos
- Obtener sangre humana de un donante sano. Permitir que la sangre se enfríe a temperatura ambiente (~ 30 min) antes de proceder al siguiente paso.
- Suavemente la pipeta de 3 ml de la temperatura ambiente media del gradiente de densidad Polimorfia en un tubo de poliestireno de 8 ml de fondo redondo. Suavemente agregar 3 ml de sangre total en la parte superior de los medios de comunicación Polimorfia. Es importante evitar la mezcla de los dos reactivos.
- Centrifugar los tubos a 500 xg durante 45 minutos a temperatura ambiente.
- Después de la centrifugación, las células mononucleares de sangre p....
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Discusión
En este experimento, se proporcionan detalles sobre un sistema sencillo para analizar la movilidad de primaria linfocitos T humanos. En los ensayos de migración in vitro se han utilizado para analizar el papel de muchas moléculas y vías de señalización implicadas en la locomoción de los diversos tipos de células. Algunos controles críticos a tener en cuenta a la hora de diseñar su propio experimento de nuestro protocolo son: 1) revestimientos adhesivos no adhesivo o no la integrina-sustrato, t.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Este proyecto fue financiado por los Institutos Nacionales de Salud Subvenciones HL087088 (MK) y HL18208 (MK).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| RPMI 1640 | GIBCO, por Life Technologies | 11875 | |
| SFB | Thermo Fisher Scientific, Inc. | SH300070.03 | |
| Penicilina-Estreptomicina | GIBCO, por Life Technologies | 15140 | |
| 1-Step Polymorphs | Accurate Chemical & Scientific Corporation | AN221725 | |
| PHA | Remel, Thermo Fisher Scientific | R30852801 | |
| IL-2 humana recombinante | R&D Systems | 202-IL | |
| IL-15 humana recombinante | R&D Systems | 247-IL | |
| Proteína G | Sigma-Aldrich | 19459 | |
| ICAM-1/Fc humana recombinante | R&D Systems | 720-IC | |
| SDF-1 humana recombinante | R&D Systems | 350-NS |
Referencias
- Hyun, Y. M., Chung, H. L., McGrath, J. L., Waugh, R. E., Kim, M. Activated integrin VLA-4 localizes to the lamellipodia and mediates t cell migration on VCAM-1. J Immunol. 183, 359-369 (2009).
- Morin, N. A., Oakes, P. W., Hyun, Y. M., Lee, D., Chin, Y. E., King, M. R., Springer, T. A., Shimaoka, M., Tang, J. X., Reichner, J. S., Kim, M.
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Reimpresiones y permisos
