移行のヒトTリンパ球の単離、培養および解析インビトロ</em
Summary
Tリンパ球遊走には、リンパ器官、血管系から出口へのホーミング中に発生し、末梢組織に入る。ここで、我々は、Tリンパ球の遊走を分析するために使用できるプロトコルを記述する<em> in vitroで</em>。
Abstract
Tリンパ球の遊走は、他の細胞や細胞外マトリックスタンパク質と発現するリガンドと細胞表面のインテグリンの接着剤の相互作用を伴います。低親和性状態からセル最先端で高親和性状態へのインテグリンの正確な時空間的活性化は、Tリンパ球遊走に重要です。<sup> 1</sup>。同様に、セルの後縁の撤回は、または腹肢、永続的なインテグリン依存性のTリンパ球の運動性を維持する上で必要なステップです。<sup> 2</sup>。白血球の過度の募集と遊走を阻害する手段として、自己免疫や炎症性疾患のターゲットのインテグリンへの多くの治療的アプローチ<sup> 3</sup>。ヒトTリンパ球遊走を調節する分子事象を研究するために、我々が利用してきた<em> in vitroで</emTリンパ球が血管から募集中遭遇する環境を模倣した二次元の基板上に細胞の移動を分析する>システム。 Tリンパ球は、最初の人間のドナーから単離され、その後刺激し、7〜10日間培養されています。アッセイ中に、Tリンパ球は、細胞間接着分子-1（ICAM – 1）、インテグリンLFA – 1のリガンド、および間質細胞由来因子-1（SDF – 1）でコーティングされた基板上に付着して移行することが許可されています。我々のデータは、Tリンパ球が〜15μm/分の回遊速度を示すことを示している。 Tリンパ球遊走は、インテグリンの阻害によって抑制することができる<sup> 1</sup>または細胞移動を調節する細胞性アクトミオシンの機械の阻害剤による<sup> 2</sup>。
Protocol
Discussion
この実験では、一次ヒトTリンパ球の運動性を分析するためにシンプルなシステムについて詳しく説明します。vitroでの遊走のアッセイでは多くの分子と種々の細胞型の運動に関与するシグナル伝達経路の役割を解明するために使用されている。我々のプロトコルから独自の実験を設計するとき心に留めておくべきいくつかの重要なコントロールが含まれます：1）、ウシ血清アル…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
このプロジェクトは、健康補助HL087088（MK）とHL18208（MK）の国立研究所によってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| RPMI 1640 | Gibco | 11875 | ||
| FBS | Thermo Scientific | SH300070.03 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| 1-Step Polymorphs | Accurate Chemical | AN221725 | ||
| PHA | Remel/Fisher Scientific | R30852801 | ||
| Rec. human IL-2 | R&D Systems | 202-IL | ||
| Rec. human IL-15 | R&D Systems | 247-IL | ||
| Protein G | Sigma Aldrich | 19459 | ||
| Rec. human ICAM-1/Fc | R&D Systems | 720-IC | ||
| Rec. human SDF-1 | R&D Systems | 350-NS |
Referencias
- Hyun, Y. M., Chung, H. L., McGrath, J. L., Waugh, R. E., Kim, M. Activated integrin VLA-4 localizes to the lamellipodia and mediates t cell migration on VCAM-1. J Immunol. 183, 359-369 (2009).
- Morin, N. A., Oakes, P. W., Hyun, Y. M., Lee, D., Chin, Y. E., King, M. R., Springer, T. A., Shimaoka, M., Tang, J. X., Reichner, J. S., Kim, M. Nonmuscle myosin heavy chain IIA mediates integrin LFA-1 de-adhesion during T lymphocyte migration. The Journal of experimental medicine. 205, 195-205 (2008).
- Hyun, Y. M., Lefort, C. T., Kim, M. Leukocyte integrins and their ligand interactions. Immunologic research. , (2009).
