يصف البروتوكول الضربة القاضية المستهدفة للتعبير الجيني في سمك الحمار الوحشي عن طريق حقن مورفولينو في الذيل.
Protocol
1. مورفولينو حقن في اليوم السابق لحقن morpholino، وجعل لوحة حقن (الشكل 1). تأكد من قطع درجة في نهاية واحدة من البئر، مما يساعد على استقرار الأسماك لإجراء microinjection. تمييع المورفولينو الموسوم بالفلورسين إلى التركيز المناسب (يوصي بدءا من 1.2 mM) ووضعها في حمام مائي 65 درجة مئ?…
Representative Results
الشكل 1 – الأرقام 1- الأرقام التي يمكن أن A. التخطيطي من لوحة الحقن، والتي هي مصنوعة من agarose ويحتوي على بئر صغيرة لعقد الأسماك خلال microinjection من مورفولينو. الشكل 2 – الأرقام 2- ?…
Materials
Morpholino
GeneTools, LLC
Morpholino should be custom designed to your protein of interest
Micro-injection pump
World Precision Instruments, Inc.
PV830
Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used
Micro-manipulator
World Precision Instruments, Inc.
MMJR
Right-handed (MMJL for lefthanded)
Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter
World Precision Instruments, Inc.
1B100F-4
These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle
Needle holder
World Precision Instruments, Inc.
5430-ALL
Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket
Needle puller
Sutter Instrument Co.
P-97
Other micropipette/needle pullers should also work
Microscope
Leica, Nikon, Zeiss
Number varies depending on the manufacturer
Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators
2-Phenoxyethanol
Sigma-Aldrich
77861-1L
Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia
Morpholino Injection: A Method to Knockdown Target Gene Expression to Study Function in Zebrafish. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20182, doi: (2023).