모르폴리노 주입: 제브라피시의 기능을 연구하기 위해 표적 유전자 발현을 노크하는 방법

Abstract

출처: 하이드 D.R., 외. 재생 성인 제브라피시 꼬리 지느러미로 모르폴리노스의 생체 내 전기화. J. 비스 익스펙. (2012)

프로토콜은 꼬리에 있는 morpholino 주입에 의하여 제브라피시에 있는 유전자 발현의 표적으로 한 녹다운을 기술합니다.

Protocol

1. 모르폴리노 주입 모폴리노를 주입하기 전날, 주사플레이트(도 1)를만든다. 미세 주입 절차에 대한 물고기를 안정화하는 데 도움이 우물의 한쪽 끝에 노치를 잘라해야합니다. 불소 태그 모폴리노를 적절한 농도(1.2mM로 시작하는 것이 좋습니다)로 희석하고 65°C 수조에 5분간 배치하십시오. 모폴리노로 바늘을적재하십시오(참고: 바늘을 …

Representative Results

그림 1. A. 아가로즈로 만들어지고 모르폴리노의 미세 주입 중에 물고기를 잡을 수있는 작은 우물이 들어있는 주입 판의 회로도. 그림 2. 모르폴리노 미세 주입의 회로도. A. 생선의 머리를 우물에서 잘라 내고 생…

Materials

Morpholino	GeneTools, LLC		Morpholino should be custom designed to your protein of interest
Micro-injection pump	World Precision Instruments, Inc.	PV830	Pneumatic PicoPump Many different microinjection systems could be used
Micro-manipulator	World Precision Instruments, Inc.	MMJR	Right-handed (MMJL for lefthanded)
Micro-injection needles, 1.0 mm outside diameter	World Precision Instruments, Inc.	1B100F-4	These are borosilicate glass capillaries, pulled into a needle
Needle holder	World Precision Instruments, Inc.	5430-ALL	Pico Nozzle Kit; make sure to inset the 1.0 mm pipette gasket
Needle puller	Sutter Instrument Co.	P-97	Other micropipette/needle pullers should also work
Microscope	Leica, Nikon, Zeiss	Number varies depending on the manufacturer	Any stereomicroscope with 20X optics and the ability to work with micromanipulators
2-Phenoxyethanol	Sigma-Aldrich	77861-1L	Anesthesia; dilute 1:1000 in fish system water for procedure, 1:500 for euthanasia