Transducción para marcar células tumorales PDX: introducción de un marcador fluorescente que expresa lentivirus en la célula tumoral in vitro

En este artículo

Resumen

Fuente: Hanna, C., et al. Etiquetado de xenoinjertos derivados de pacientes con cáncer de mama con reporteros trazables para estudios de crecimiento tumoral y metástasis. J. Vis. Exp. (2016).

El siguiente video describe una técnica de transducción para marcar (xenoinjertos derivados del paciente) células tumorales PDX, que se utiliza para introducir lentivirus que expresan proteína verde fluorescente y reporteros de luciferasa en la célula tumoral in vitro.

Protocolo

1. Transducción de células tumorales derivadas de PDX

Centrifugar las células tumorales disociadas a 300 g x 5 min y resuspender en un medio de mamosfera de 2 ml. Cuente las células viables utilizando la exclusión de azul de tripán (resuspenda las células digeridas en un tampón de lavado de 5 ml y cuente las células viables y no viables utilizando la exclusión de azul de tripano. Brevemente, mezcle 50 μl de células y 50 μl de azul de tripán y cuente el azul de tripán, excluyendo las células, con un hemocitómetro).
Prepare 10 ml de medio para mamosfera que contenga 8 μg/ml de polibreno (2 μl de polibreno madre por ml de medio).
Determine....

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Resultados

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Figura 1: Seguimiento de la eficiencia de la transducción en células PDX disociadas. A) Células disociadas de PDX enriquecidas para células epiteliales humanas (depleción de Lin+) 24 horas después de la transducción con partículas lentivirales pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro. B) Células disociadas de PDX de un experimento separado, sin enriquecimiento de células epiteliales, 72 horas después de.......