Trasduzione per etichettare le cellule tumorali PDX: introduzione del lentivirus che esprime marcatore fluorescente nella cellula tumorale in vitro
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Hanna, C., et al. Etichettatura degli xenoinnesti derivati dal paziente con cancro al seno con reporter tracciabili per la crescita del tumore e gli studi sulla metastasi. J. Vis. Exp. (2016).
Il seguente video descrive una tecnica di trasduzione per etichettare le cellule tumorali PDX (xenograft derivati dal paziente), che viene utilizzata per introdurre il lentivirus che esprime proteine verde-fluorescenti e giornalisti luciferasi nella cellula tumorale in vitro.
Protocol
1. Trasduzione di cellule tumorali derivate dalla PDX Centrifugare cellule tumorali dissociate a 300 g x 5 min e resospend in 2 ml di mezzi mammosfera. Contare le cellule vitali utilizzando l’esclusione blu tripano (cellule digerite Resuspend in tampone di lavaggio da 5 ml e contare celle vitali e non vitali utilizzando l’esclusione blu del trypan. In breve, mescolare 50 μl di cellule e 50 μl di tripano blu e contare le cellule trypan-blu escludendo le cellule usando un emocitometro). Preparare 10 m…
Representative Results
Figura 1: Monitoraggio dell’efficienza di trasduzione nelle cellule PDX dissociate. A) Cellule dissociate da PDX arricchite per cellule epiteliali umane (esaurimento Lin+) 24 ore dopo la trasduzione con particelle lentivirali pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro. B) Cellule dissociate da PDX da un esperimento separato, senza arricchimento cellulare epiteliale, 72 ore dopo la trasduzione con pHAGE-E…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 (1:1) | Hyclone | SH30023.01 | |
| bFGF | BD Biosciences | 354060 | |
| EGF | BD Biosciences | 354001 | |
| Heparin | Sigma | H4784 | |
| B27 | Gibco/Thermo Fisher | 17504-44 | |
| Anti-fungi-antibiotics | Hyclone | SV30010 | |
| HBSS Red Ca2+/Mg2+ free | Hyclone | SH30031.02 | |
| Hepes | |||
| Cultrex | Cultrex | 3433-005-01 | Basement Matrix Extract (BME) |
| 30 °C shaker | NewBrunswick Scientific CO. INC | Series 25 Incubator Shaker |
Citar este artículo
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).