Ensayo de extracción de ARN: un método para extraer ARN de células de cáncer de pulmón transfectadas con miARN

Resumen

Fuente: Hossian, A. K. M. N. et al., Análisis de tratamientos combinatorios de miRNA para regular el ciclo celular y la angiogénesis. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe el protocolo de extracción de ARN de células de cáncer de pulmón transfectadas con miARN. Este enfoque se puede utilizar para identificar una actividad de tratamiento combinatoria de miRNA para detener el ciclo celular y la angiogénesis.

Protocolo

1. Transfección de miR-143 y miR-506

>PRECAUCIÓN: Utilice guantes de látex, gafas protectoras y una bata de laboratorio mientras realiza los experimentos descritos. Cuando sea necesario, utilice la cabina de bioseguridad con el ventilador del armario encendido, sin bloquear las vías respiratorias ni perturbar el flujo de aire laminar. Coloque siempre la ventana de vidrio protectora a la altura adecuada, según lo descrito por el fabricante.

1. Siembre células NSCLC A549 en un matraz T25 cm2/placa de pocillos 6/96 pocillos en medio DMEM/F12K suplementado con 10% de FBS y 1% de penicilina-es....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
A549 Células de cáncer de pulmón de células no pequeñas	ATCC	ATCC CCL-185
Silenciador Ambion Control Negativo Nº 1 siRNA	Ambiente	AM4611
has-miR-143-3p miRNA Mímico	Abm	MCH01315
has-miR-506-3p miRNA Mímico	Abm	MCH02824
Suero fetal bovino (FBS)	Fisher Científico	10438026
Solución salina tamponada con fosfato HyClone (PBS)	Fisher Científico	SH30256FS
DMEM 4,5 g/L de glucosa, sin piruvato de sodio, con L-glutamina	VWR	VWRL0100-0500
Invitrogen UltraPure DNasa/Agua destilada sin RNasa	Invitrogen	Teléfono 10-977-015
Kits de ARN rápido	Investigación de Zymo	R1055
Etanol, Absoluto (200 Proof), Grado de Biología Molecular,	Biorreactivos de Fisher	BP2818500
-80 °C Congelador	VWR	VWR40086A
Nanogota	Termo Científico	NanoDrop una C
Placa de 96 pocillos	CELLTREAT Científico	50-607-511
Penicilina-estreptomicina 10/10	Antlanta Biologicals	B21210
Incubadora de CO2	Termo Científico	HERAcell 150i
ADN	Investigación de Zymo	E1010
Mezcla de nutrientes F-12K (Kaighn's Mod.) con L-glutamina, Corning	Corning	45000-354
Suero Fetal Bovino - Premium	Antlanta Biologicals	S11150
Centrífuga de temperatura controlada matchine	Termo Científico	ST16R
Matchine de microcentrífuga con control de temperatura	Eppendrof	5415R