Generación de células dendríticas derivadas de la médula ósea: un método para generar células dendríticas a partir de médula ósea de ratón

Resumen

Fuente:Nguyen, H. D., et al. Plataforma de trasplante de médula ósea para investigar el papel de las células dendríticas en la enfermedad de injerto contra huésped. J. Vis. Exp.. (2020).

Este video describe un protocolo para la generación de células dendríticas--células presentadoras de antígenos clave que activan las células T-- a partir de la médula ósea de un ratón adulto.

Protocolo

1. Generar células dendríticas derivadas de la médula ósea (BM-DCs).

1. Aísle la médula ósea de los fémures y tibias de ratones WT o factor B (fB)^-/- en el fondo B6. Brevemente, recoge la tibia y el fémur de ambas piernas con pinzas y tijeras. Colóquelos en RPMI helados que contengan 1% de FCS y 100 U/mL de penicilina/estreptomicina y 2 mM de L-glutamina (1% RPMI) en tubos cónicos de 50 mL. Limpie a fondo el fémur y los huesos de la tibia eliminando todos los tejidos musculares con pinzas y tijeras. Transfiera el fémur y la tibia de los tubos cónicos de 50 mL a una placa de Petri de 92 mm de diámetro que contenga 1% de RPMI. Con unas tijeras, corte....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
10 veces PBS	Fisher Científico	BP3994	Búfer MACS
B6 fB-/- ratones	Universidad de Florida Central	En casa	Destinatarios
B6. Ratones Ly5.1 (CD45.1 + )	Río Charles	546	donantes
Ratones BALB/c	Río Charles	28	Receptores de trasplantes
Ratones C57BL/6	Río Charles	27	Donantes/Receptores
Suero fetal bovino (FBS)	Sistema de investigación y desarrollo de Atlanta Bilogicals	D17051	cultivo celular
Lipopolisacárido (LPS)	Millipore Sigma	L4391-1MG	DC maduro
Incubadora New Brunswick Galaxy 170R	Eppendorf	Galaxy 170 R	cultivo celular
Penicilina+estreptomicinaPenicilina/ Estreptomicina (10.000 unidades de penicilina / 10.000 mg/ml de estreptococo)	GIBCO	Año 15140	Medio
RPMI 1640	Thermo Fisher Scienctific	11875-093	Medio