Мы предоставляем подробный протокол для подготовки первичных элементов отделены от<em> Drosophil</em> Эмбрионов. Способность осуществлять эффективное возмущение RNAi, вместе с другими молекулярными, биохимические и клеточные методы визуализации позволит разнообразие вопросов, которые будут рассмотрены в<em> Drosophila</em> Первичные клетки.
Abstract
Здесь мы опишем способ получения и культивирования первичных элементов отделены от эмбрионов дрозофилы гаструлы. Короче говоря, большое количество постановочных эмбрионов из молодых и здоровых мух собираются, стерилизовать, а затем физически распадается на суспензии отдельных клеток с использованием стеклянного гомогенизатора. После того, как при посеве на культуру пластин или камеры слайды на соответствующей плотности в культуральной среде, эти клетки могут дифференцироваться в дальнейшем несколько морфологически-различных типов клеток, которые могут быть определены их специфические маркеры клеток. Кроме того, даны условия для лечения этих клеток с двухцепочечной (DS) для выявления РНК гена нокдаун. Эффективное RNAi у дрозофилы первичных элементов осуществляется просто купание клеток в дсРНК содержащей культуральной среде. Способность осуществлять эффективное возмущение RNAi, вместе с другими молекулярными, биохимических, клеточных анализ изображений, позволит разнообразные вопросы, требующие ответа у дрозофилы первичных элементов, особенно связанных с дифференцированным мышц и нервных клеток.
Protocol
1. Подготовка летать клетки Расти дрозофилы (штаммов дикого типа, таких как Орегон-R или любой генотип) в удобных контейнерах, таких как 32-унций чашки насекомое. Передача новых eclosed летит в большом эмбриона сбора клеток или летать населения клетках. Перемещение клето…
Discussion
Развития, структура первичной культуры клеток дрозофилы может сильно варьироваться, возможно из-за нескольких переменных во время первичного процесса подготовки клетки. Прежде всего, мух для откладки яиц должна быть молодым (в течение недели назад) и здоровый (без вирусной или ба?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
JB была поддержана Дэймон Руньона Cancer Research стипендии Фонда DRG-1716-02. JZ была поддержана NIH / NIGMS стипендий F32 GM082174-02. Н. П. является следователь Медицинского института Говарда Хьюза.