Cultures organotypiques d'hippocampe Slice
Summary
Nous décrivons une méthode pour préparer organotypiques coupes d'hippocampe qui peut être facilement adaptée à d'autres régions cérébrales. Tranches de cerveau sont fixées sur les membranes poreuses et milieux de culture est autorisée à former une interface. Cette méthode préserve l'architecture brute de l'hippocampe pour 2 semaines de culture.
Abstract
L'hippocampe, une composante du système limbique, joue un rôle important dans la mémoire à long terme et de la navigation spatiale 1. Neurones de l'hippocampe peut modifier la force de leurs connexions, après de brèves périodes de forte activation. Ce phénomène, connu sous le nom de potentialisation à long terme (LTP) peuvent durer des heures ou des jours et est devenu le mécanisme de meilleur candidat pour l'apprentissage et la mémoire 2. De plus, l'anatomie bien définis et la connectivité de l'hippocampe 3 a fait un système modèle classique pour étudier la transmission synaptique et la plasticité synaptique 4.
Comme notre compréhension de la physiologie des synapses hippocampiques a grandi et est devenu acteurs moléculaires identifiés, un besoin de manipuler des protéines synaptiques est devenu impératif. Organotypiques cultures hippocampiques offrent la possibilité de manipulation génétique simple et précise intervention pharmacologique, mais maintenir l'organisation synaptique qui est essentiel pour comprendre le fonctionnement des synapses dans un contexte plus naturaliste que la routine des méthodes de culture neurones dissociés.
Nous présentons ici une méthode pour préparer et la culture des coupes d'hippocampe qui peut être facilement adaptée à d'autres régions cérébrales. Cette méthode permet un accès facile à des tranches de manipulation génétique en utilisant des approches différentes comme une infection virale ou biolistique 5,6 7. En outre, les tranches peuvent être facilement récupérées pour des analyses biochimiques 8, ou transférés à des microscopes pour l'imagerie 9 ou 10 expériences électrophysiologiques.
Protocol
Discussion
Cette méthode est basée sur la première méthode décrite par Stoppini et al. 11 et offre une manière rapide à des tranches de la culture d'hippocampe. L'aspect le plus important de ce protocole est de maintenir les tranches stériles, c'est pourquoi il est essentiel d'utiliser les techniques appropriées de stériles et de bien désinfecter et stériliser tout le matériel en contact avec le tissu.
Différentes sources de sérums peuvent influencer l…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été financé par le NINDS – NIH R01NS060756
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cell culture inserts | Millipore | PICM03050 | ||
| 6 well plates | BD Falcon | 353046 | ||
| Tissue Slicer | Stoelting | 51425/51415 | ||
| Microscope | Olympus | SZX7-ILLD2-100 | ||
| Hippocampus dissecting tool | F.S.T | 10099-15 | ||
| Large utility scissors. Perfection | F.S.T | 37500-00/37000-00 Right/ Left handed | ||
| Iris Spatula | F.S.T | 10093-13 | ||
| Straight spatula | F.S.T | 10094-13 | ||
| Rounded spoon micro spatula | VWR | 57949-039 | ||
| Dissecting single cutting edge needle | Electron Microscopy Science | 72946 | ||
| Dissecting tweezers | Dummont | #2 | ||
| Small dissecting scissors | F.S.T | 14060-10 | ||
| MEM Eagle medium | Cellgro | 50-019 PB | ||
| Horse serum heat inactivated | Invitrogen | 26050-88 | ||
| L-Glutamine (200 mM) | Invitrogen | 25030081 | ||
| CaCl2 (1 M) | Sigma | C3881 | ||
| MgSO4 (1 M) | Sigma | M2773 | ||
| Insulin (1 mg/ml), dissolved in HCl 0.01 N | Sigma | I0516 | ||
| Ascorbic Acid, solution (25%) | Sigma | A4544 | ||
| D-Glucose | Sigma | G5767 | ||
| NaHCO3 | Sigma | S6014 | ||
| Hepes | Sigma | H7523 | ||
| Sucrose | Sigma | S5016 | ||
| Phenol Red Solution 0.5% in DPBS | Sigma | P0290 | ||
| KCl | Sigma | P3911 | ||
| MgCl2 (1 M) | Sigma | M9272 |
Referencias
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