Una partícula desarrollado recientemente la novela de aglutinación (PA) de ensayo utilizando virus molécula del receptor permite una identificación rápida y fácil de poliovirus (PV). En este artículo vamos a mostrar el procedimiento para el ensayo de PA para la identificación de PV.
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Artículo de método
Método de aglutinación de partículas para la identificación de poliovirus
En este artículo
Resumen
Resumen
En la Iniciativa de Erradicación Mundial, el diagnóstico de laboratorio desempeña un papel fundamental mediante el aislamiento y la identificación de PV de las muestras de heces de parálisis flácida aguda (PFA). En la Organización Mundial de la Salud (OMS), la Red de Laboratorios Mundial de la Poliomielitis, el aislamiento y la identificación PV están llevando a cabo mediante el sistema de cultivo celular y en tiempo real RT-PCR, respectivamente. En la era posterior a la erradicación de la energía fotovoltaica, los procedimientos de identificación simple y rápida sería de gran ayuda para la rápida confirmación de casos de polio en los laboratorios nacionales. En el presente estudio, vamos a mostrar el procedimiento de ensayo de la novela de PA desarrollado para la identificación de PV. Este ensayo PA utiliza la interacción de la energía fotovoltaica receptor (PVR) y el virión molécula que es la afinidad específica y uniforme para todos los serotipos de la energía fotovoltaica. El procedimiento es sencillo (un procedimiento de paso en las placas de reacción) y rápido (los resultados se pueden obtener dentro de las 2 h de reacción), y el resultado es visualmente observado (observación de la aglutinación de partículas de gelatina).
Protocolo
1. Preparación de medio de mantenimiento (MM) y el crecimiento medio (GM)
Para la preparación de MM y GM, consulte un manual de laboratorio Polio de la OMS 1. Dulbecco modificado de Eagle (DMEM) suplementado con 2% de suero fetal bovino (FCS) y el 10% de FCS podrían ser utilizados como sustitutos de la MM y GM, respectivamente.
2. Preparación de anticuerpos anti-PV
- Reconstituir anti-PV anticuerpos (RIVM PV escribiendo antisuero) mediante la adición de agua (0,5 ml por vial) a cada vial de anticuerpos anti-PV (tipo 1, 2, ó 3). Añadir este anticuerpo soluciones reconstituida (0,5 ml cada una)....
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Discusión
El único punto de este ensayo PA es la utilización de la molécula de PVR en lugar de anticuerpos anti-PV para la detección de FV 2. Esto permite una interacción específica de las partículas sensibilizadas con gelatina de PV con una afinidad uniforme para los tres serotipos de la energía fotovoltaica 3-6. Se utilizó un formulario de inmunoadhesina de PVR (PVR-IgG2a) para la sensibilización de las partículas de gelatina, ya que las formas monoméricas de PVR sólo tienen afinidades moderada al sitio de unión simp.......
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Divulgaciones
Souji Masujima es un empleado del Departamento de Diseño de Nuevos Productos, Fujirebio Inc.
Agradecimientos
Estamos muy agradecidos a Junko Wada por su excelente asistencia técnica. Estamos agradecidos con el profesor Akio Nomoto de la amabilidad de ofrecer un vector de expresión de baculovirus para el PVR-IgG2a. Este estudio fue apoyado en parte por subvenciones-en-Ayudas a la Promoción de la Erradicación de la Poliomielitis y la Investigación Emergentes y Re-emergentes enfermedades infecciosas del Ministerio de Salud, Trabajo y Bienestar Social.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| Sensibilizados partículas de gelatina | Fujirebio Inc. | Kit de prueba | |
| La reconstitución de amortiguación | Fujirebio Inc. | Kit de prueba | |
| Microplacas | Fujirebio Inc. | Kit de prueba | |
| Anti-PV anticuerpos | RIVM |
Referencias
- World Health Organization. Polio Laboratory Manual (4th edition) WHO/IVB/04.10. , 4th Edition, World Health Organization. (2004).
- Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. Development of a particle agglutination method with soluble virus receptor for identification of poliovirus. ....
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Reimpresiones y permisos
