Выделение функциональных сердечно иммунных клеток

Summary

Этот метод выделения функциональных иммунных клеток из сердца представляет собой альтернативу обычным методам коллагеназы пищеварение, что приводит к нежелательной активации иммунной клетки, в результате чего снизилась чувствительность этих клеток. Наш метод изоляции дает функциональной сердечной клетки иммунной системы, избегая проблем, связанных с ферментативного пищеварения.

Abstract

Сердечные клетки иммунной системы приобретают интерес к роли, которую они играют в патологический ремоделирования во многих сердечных заболеваний ^1-5 Эти клетки иммунной системы, в том числе тучные клетки, Т-клетки и макрофаги;. Хранение и различных биологически активных медиаторов, включая цитокины и протеазы, такие как триптазы. ^6-8 Эти посредники было показано, что ключевую роль в метаболизме внеклеточной матрицы, активизируя матричных металлопротеиназ или причинение коллагена накопления модулирующей функции сердечных фибробластов. ^9-11 Тем не менее, имеющиеся методы для выделения сердечной клетки иммунной системы имеют было проблематично, поскольку они используют бактериальные коллагеназы переваривать ткани миокарда. Этот метод вызывает активацию иммунных клеток и, следовательно, потеря функции. Например, сердечные тучные клетки становятся значительно менее чувствительны к соединениям, которые вызывают дегрануляцию ^12. Поэтому мы разработали методику, которая позволяет тОн изоляции функциональных сердечных клеток иммунной которые привели бы к более глубокому пониманию роли этих клеток в сердечной болезни. ^{13, 14}

Этот метод требует знакомства с анатомического расположения мечевидного отростка крысы, подмышечной впадины и серповидной связки, и перикарда сердца. Эти ориентиры важны для увеличения успеха процедуры и обеспечить более высокую доходность сердечных клеток иммунной системы. Эти изолированные иммунные клетки сердечной затем могут быть использованы для характеристики функциональности, фенотип, зрелость и совместное культуры эксперименты с другими сердечными клетками, чтобы получить лучшее понимание их взаимодействия.

Protocol

1. Подготовка баланса солевой раствор Хэнкса (HBSS) Автоклав 1 л стеклянный стакан, 1000 мл, мерный цилиндр, и движение бар. Развести HBSS решение порошка в автоклаве 1 л стеклянный стакан на 900 мл знаком с двойным дистиллированной воды. Смешайте HBSS решение с 3,4 г соли Hepes Na + и отре?…

Discussion

Этот метод выделения сердечной клетки иммунной системы дает возможность анализа их функции, фенотип, и зрелость без нежелательных активации, который обычно происходит во время традиционного ферментативную технику изоляции пищеварения. Среднее общее число клеток, полученных с помощь…

Materials

Name of Reagent and Equipment	Company	Catalogue Number	Comments
Hanks’ Balanced Salt	Sigma	H4891	One bottle makes 1 L of Hanks’ Balance Salt Solution. Reconstitute Hanks’ Balance Salt Solution as a part of the procedure.
Antibiotic- Antimyotic	Gibco	15240-062
HEPES	Sigma	H3784
Bovine Serum Albumin	Sigma	A3912
250 mL Nalogene Filter Bottle	Thermoscientific	157-0020
12 N HCL	Fisher Scientific	CAS 7647-01-0	For 6 N, add equal volumes of HCL to deionized water.
10 N NaOH	Fisher Scientific	SC267	For 5 N, add equal volumes of NaOH to deionized water.
Double Distilled Water

Table of Specific Equipment:

Name of Reagent and Equipment	Company	Catalogue Number	Comments
3-O Suture Silk Braided	Ethicon Products	SA64H
Small Animal Ventilator	CWE Incorporated	SAR-830	Set breathing rate to 40.5 breaths per min.
Bevel 18 gauge needle	BD Biosciences	305199	Trim needle by 1/2 to 3/4 of its original length for use as a tracheal tube.
Teflon Tip (with needle removed) of 24-gauge Baxter quick-cath catheter	Baxter	2N111	Reduce the Teflon Tip length by 1/2 to 3/4.
10 cc syringe	Fisher Scientific	14-823-16B
15 mL Falcon Tubes	BD Biosciences	352097
Sorvall RT6000B Refrigerated Centrifuge	Fisher Scientific	75-004-377	Remember to pre-cool and keep at 4°C.
Hyclone	Thermoscientific	S300030.02
Hemocytometer	Hausser Scientific	HS-LB-1483