인간의 유방 수술 폐기 자료를 처리하는 방법이 설명되어 있습니다. organoids의 형태로 처리 조직은, 무기한 정지 또는 장기 성장 문화에 배치 저장할 수 있습니다. 이 방법은 실험 정상적인 인간 내피 세포 생물학의 심사 및 외인성 섭동의 효과를 수 있습니다.
실험 정상적인 인간의 유방 상피 세포 (HMEC) 행동의 검사 방법과 정상 세포 이상 속성을 취득은 체외 문화 시스템에 의해 촉진 될 수 생체 생물학에 더 정확하게 모델입니다. 세포 차별화를 공부 인간의 유래 물질의 사용은 노화, 노화, 그리고 불멸화 1-2 인간과 일반적으로 활용 쥐 세포 사이의 이러한 속성에서 많은 중요한 분자의 차이 주어진 특히 바람직하다. 정상과 비정상 조직의 대량는 감소 mammoplasty과 유방 절제술의 수술의 주파수로 인해 사용할 수 있기 때문에 유방 세포는 편리한 모델 시스템을 제시한다.
유선은 많은 서로 다른 세포 유형, 예를 들어, 상피, 지방, 중간 엽, 내피의 복잡한 혼합물로 구성되어 있습니다. 상피 세포는 젖 분비의 차별화 된 유방 기능을 할 책임이 있습니다또한 인간 유방암의 대부분의 출처입니다. 우리는 순수한 상피 구성 요소로뿐만 아니라 중간 엽 세포에게 3 유선 수술 폐기 조직을 처리하는 방법을 개발했습니다. 처리 자료는 무한정 냉동 보관 또는 기본 문화에 시작 할 수 있습니다. 외과 폐기 자료는 실험실로 이송하고 수동 상피 포함하는 조직에 풍부하게 해부하고 있습니다. 해부 조직의 후속 소화은 지하 막에있는 상피 조직에서 collagenase와 hyaluronidase 스트립 stromal 자료를 사용합니다. 상피 나무의 결과 작은 조각 (organoids)는 고정 기공 크기의 멤브레인에 연속 여과하여 소화 기질로부터 분리 될 수있다. 기공 크기에 따라 분수가 큰 폐포 / ductal 조각, 작은 폐포 클러스터, 또는 stromal 세포로 구성된 얻을 수 있습니다. 문화는 비밀입니다으로보다는 organoids로 시작하는 경우 우리는 뛰어난 성장을 관찰 한sociated 단일 세포. 낮은 스트레스를 유발 미디어를 사용 문화에 organoids의 위치는 여러 계보 (Lineage) 유형 (myoepithelial, luminal, 전구) 4-5의 마커와 일반 HMEC의 장기적인 성장을 지원합니다. 세포의 충분한 숫자는 높은 처리량 modalities를 사용하여 표준화 된 셀 배치뿐만 아니라 심문을 사용하여 다양한 실험 시험을 허용 한 개인의 조직에서 얻을 수 있습니다.
양식 HMEC는 성장, 분화, 노화, 그리고 노화, 어떻게 이러한 일반적인 프로세스가 불멸과 악성 변화 4-15,16 동안 변경 아르에 관한 일반적인 과정을 조사 연구 다양한 고용되었습니다. 세포 외 기질 재료, 다른 세포 유형, 및 / 또는 3D 문화의 존재 성장의 효과는 플라스틱 5,15의 성장과 비교 될 수있다. 양식 HMEC는 정상 세포로 시작, 그 요인을 검토하는 실험적으로 다루기 쉬운 시스템을 제공인간의 노화와 발암을 추진하거나 방지 할 수 있습니다.
여기에 제시된 인간의 유방 조직 처리 방법은 인간의 가슴속에 세포 유형의 이기종 혼합물에서 순수한 유방 상피 세포를 획득 할 수 있습니다. 고정 크기의 구멍을 통해 여과 소화 stromal 매트릭스에서 유선의 다른 분수 (예를 들어, ductal 및 ductal – 폐포 대 폐포)의 분리 할 수 있습니다. Isogenic 유방 섬유 아세포는 상피 세포와 일치하도록 얻을 수 있습니다. 냉동 소화 물질은 30 년 좋은 생존은 그대로 남아 있습니다. 이 방법은 모든하지만 매우 섬유 유방 조직에 성공적으로 일을하고, 수행 할 수 간단했다. 유방 조직 처리의 다른 변형은 가능한 깨끗하고, 또는 분리 된 상피 분수를 제공하지 않는 존재합니다. 같은 M87A의 낮은 스트레스를 유도하는 매체와 문화에 처리 organoids의 위치는 여러 계보 (Lineage) 마커와 HMEC의 장기 성장을 할 수 있습니다. 플라스틱 배양 된 HMEC는 여전히 장군에게 능력을 보유생체 같은 혈통 관계의 정상적인있는 테 3D 구조. 이 HMEC 문화는 정상적인 HMEC 행동과 노화와 변화를 추진하거나 억제 할 수 있습니다 요인의 높은 처리량을 포함한 광범위한 실험 조사, 적합합니다.
The authors have nothing to disclose.
말, JCG, 그리고 부인은 NIA (R00AG033176 및 R01AG040081)와 연구실 감독 연구 및 개발, # DE-AC02-05CH11231 에너지 계약의 미국 부서에서 지원됩니다.
Glass Petri dish 15 cm | VWR | 89000-308 |
Scissors 6.5″ | VWR | 82027-594 |
Forceps 8″ | VWR | 82027-436 |
Scalpels disposable | Miltex | 4-411 |
Collagenase | SIGMA | C0130 |
Hyaluronidase | SIGMA | H3506 |
Insulin | SIGMA | I5500 |
DMSO | SIGMA | D8418 |
Pennicillin/Streptomycin | Life Technologies | 15140-122 |
Fungizone | Life Technologies | 15290-018 |
Polymixin B sulfate | Life Technologies | 21850-029 |
Fetal Bovine Serum | Life Technologies | 26140-087 |
Trypsin 0.05% 100 ml | Life Technologies | 25300-054 |
DMEM/F12 | Life Technologies | 11039-021 |
HulaMixer | Life Technologies | 159-20D |
Cell strainer 100 μm | BD Falcon | 352360 |
Cell strainer 40 μm | BD Falcon | 352340 |
Tubes 15 ml | Greiner bio-one | 188-261 |
Tubes 50 ml | Greiner bio-one | 227-261 |
TC dishes 10 cm | Greiner bio-one | 664-160 |
TC dishes 6 cm | Greiner bio-one | 628-160 |
Cryogenic vials | Nalgene | 5000-1020 |
Heamocytometer | Hauser Scientific | 1490 |
Centrifuge | Eppendorf model | 5702 |