El aislamiento de hepatocitos humanos por una colagenasa perfusión Procedimiento de dos pasos

Serene M.L. Lee; Celine Schelcher; Maresa Demmel; Maria Hauner; Wolfgang E. Thasler

doi:10.3791/50615

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Artículo de método

El aislamiento de hepatocitos humanos por una colagenasa perfusión Procedimiento de dos pasos

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DOI:

10.3791/50615

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3 de septiembre de 2013

Serene M.L. Lee¹^,² , Celine Schelcher¹ , Maresa Demmel²^,³ , Maria Hauner³ , Wolfgang E. Thasler⁴

¹Experimental Surgical Research, Grosshadern Hospital, Munich, ²Center for Liver Cell Research, Grosshadern Hospital, Munich, ³Hepacult LLC, Regensburg, ⁴Department of Surgery, Grosshadern Hospital, Munich

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Resumen

Se describe un procedimiento de perfusión con colagenasa de dos etapas modificado para el aislamiento de hepatocitos humanos. Este método también se puede aplicar a otros hígados de mamíferos. Los hepatocitos aislados están disponibles con un alto rendimiento y la viabilidad, por lo que un modelo adecuado para la investigación científica en áreas como la regeneración hepática, farmacocinética y toxicología.

Resumen

El hígado, un órgano con una capacidad de regeneración excepcional, lleva a cabo una amplia gama de funciones, tales como la desintoxicación, el metabolismo y la homeostasis. Como tal, los hepatocitos son un modelo importante para una gran variedad de preguntas de investigación. En particular, el uso de hepatocitos humanos es especialmente importante en los campos de la farmacocinética, la toxicología, la regeneración del hígado y la investigación de translación. Por lo tanto, este método presenta una versión modificada de un procedimiento de perfusión con colagenasa de dos etapas para aislar los hepatocitos como se ha descrito por Seglen ^1.

Anteriormente, los hepatocitos han sido aislados por métodos mecánicos. Sin embargo, los métodos enzimáticos han demostrado ser superior como hepatocitos conservan su integridad y función estructural después del aislamiento. Este método que aquí se presenta se adapta el método previamente diseñado para hígados de rata a pedazos de hígado humano y los resultados en un gran rendimiento de hepatocitos con una viabilidad de 77 ± 10%. La principaldiferencia en este procedimiento es el proceso de cannulization de los vasos sanguíneos. Además, el método descrito aquí también se puede aplicar a los hígados de otras especies con tamaños de hígado o de los vasos sanguíneos comparables.

Introducción

Una suspensión de células de hígado puede prepararse a partir del hígado por métodos mecánicos o enzimáticos. Los métodos mecánicos utilizados para preparar las células del hígado enteros incluyen obligar al hígado a través de una gasa ^2, agitando un trozo de hígado con perlas de vidrio en un agitador de Kahn ^3, utilizando homogeneizadores de vidrio con morteros sueltas ^4,5 etc Con los años, los métodos mecánicos han caído en favor debido a los daños a las membranas celulares y la pérdida de función de los hepatocitos aislados ^6,7. En consecuencia, el uso de un método enzimático es actualmente el principal método p....