Transección del nervio tibial - Un modelo normalizado para la atrofia del músculo esquelético denervación inducida en ratones

Resumen

El modelo de transección del nervio tibial es un bien tolerado, validado, y reproducible modelo de atrofia del músculo esquelético. El modelo de protocolo quirúrgico se describe y se demuestra en C57Black6 ratones.

Resumen

El modelo de transección del nervio tibial es un bien tolerado, validado, y reproducible modelo de atrofia del músculo esquelético inducida por desnervación en roedores. Aunque originalmente desarrollado y utilizado ampliamente en la rata, debido a su tamaño más grande, el nervio tibial en ratones es lo suficientemente grande que pueda ser manipulado fácilmente, ya sea con aplastamiento o transección, dejando las ramas del nervio peroneal y sural del nervio ciático intacta y preservando así sus músculos en cuestión. Por lo tanto, este modelo ofrece las ventajas de la inducción de una menor morbilidad y impedimento de la deambulación que el modelo de transección del nervio ciático y también permite a los investigadores estudiar los mecanismos biológicos fisiológicos, celulares y moleculares que regulan el proceso de la atrofia muscular en ratones diseñados genéticamente. El nervio tibial suministra el gastrocnemio, sóleo y plantar los músculos, por lo que su corte transversal permite el estudio de los músculos esqueléticos desnervado compuesto por fibras de contracción rápida de tipo II y / o de tipo I de contracción lentafibras. Aquí se demuestra el modelo de transección del nervio tibial en el C57Black6 ratón. Evaluamos la atrofia del músculo gastrocnemio, como representante de un músculo, en 1, 2, y 4 semanas después de la denervación mediante la medición de los pesos musculares y del tipo de área de la sección transversal de la fibra específica en parafina secciones histológicas immunostained para la miosina rápida contracción.

Introducción

Denervación del músculo esquelético, debido a una lesión traumática de nervios periféricos, la enfermedad o la intervención farmacológica, resulta en la pérdida inmediata de la función contráctil muscular voluntario. Muscle concomitantemente comienza a atrofiarse y esta atrofia es reversible si reinervación oportuna y de buena calidad produce ^1,2. En la ausencia de reinervación, atrofia miofibrilar progresa, y cambios biológicos irreversibles en el músculo se produce con la fibrosis muscular y muerte miofibras. Aquí se demuestra el modelo de transección del nervio tibial, un modelo de la denervación inducida por la atrofia muscular y la fibrosis en los rat....

Protocolo

Antes de utilizar este modelo, los investigadores deben haber recibido la aprobación para el protocolo quirúrgico del uso de los animales de su institución órgano de gobierno. El modelo es aprobado por la Junta de Ética de la Investigación, Hamilton Health Sciences Corporation, la Universidad McMaster (AUP # 10/04/24) y se lleva a cabo en estricta conformidad con las recomendaciones formuladas por el Consejo Canadiense de los Animales.

1. Ratón Preparación

1. Pesar el ratón. Inducir la anestesia con isoflurano al 5% o 2% de halotano. El circuito utilizado debe garantizar compactación adecuada de la anestesia para proteger el ciruj....

Resultados

Transección del nervio tibial desnerva el gastrocnemio, sóleo y plantar los músculos de la pantorrilla. Aquí se evalúa el desarrollo de la atrofia en los músculos gemelos, como un músculo representativo. Músculo gastrocnemio fue cosechada de 2-3 meses de edad C57Black 6 ratones (Jackson Laboratories) denervado para 1, 2, o 4 semanas. Pesos musculares disminuyen progresivamente (Figura 1), al igual que el área de sección transversal de las fibras de tipo II musculares de contracción rápida .......

Discusión

El modelo de transección del nervio tibial de la atrofia del músculo esquelético denervación inducida es un modelo comúnmente empleado y bien validado en ratas. Hemos adaptado este modelo para su uso en los ratones, lo que permite al investigador para tomar ventaja de la existencia de ratones modificados genéticamente y estudiar el proceso de la atrofia muscular in vivo en ausencia de proteínas cruciales para la regulación de la masa muscular ^7,8. Los músculos gemelos y sóleo, tanto desnervar en este.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Reactivos y Materiales
10-0 Sutura de nylon	Ethicon	2850G
5-0 Sutura de Vicryl	Ethicon	J553G
Equipment
Spring tijeras de microdisección	Herramientas quirúrgicas finas	15021-15
Pinzas ultrafinas	Cirugía fina Herramientas	11370-40
Micro portaagujas sin bloqueo (atornillador)	Herramientas quirúrgicas finas	12076-12
Retractor de resorte	Herramientas quirúrgicas finas	17000-02