Tridimensional Modelo Co-cultura para la interacción tumor estromal

Resumen

Aquí presentamos un protocolo para el cocultivo en tres dimensiones, que es útil para investigar las interacciones multicelulares y la modulación dependiente de la matriz extracelular del comportamiento de las células cancerosas. En este modelo experimental, las células cancerosas se cultivan en geles de colágeno incrustados con fibroblastos asociados al cáncer humano.

Resumen

La progresión del cáncer (iniciación, crecimiento, invasión y metástasis) se produce a través de interacciones entre las células malignas y las células del estroma tumoral circundante. El microambiente tumoral está compuesto por una variedad de tipos de células, como fibroblastos, células inmunitarias, células endoteliales vasculares, pericitos y células derivadas de la médula ósea, incrustadas en la matriz extracelular (MEC). Los fibroblastos asociados al cáncer (CAF) tienen un papel protumorigénico a través de la secreción de factores solubles, la angiogénesis y la remodelación de la MEC. Los modelos experimentales para la supervivencia, proliferación, migración e invasión de células cancerosas se han basado principalmente en cultivos de tejidos monocelulares y monocapa bidimensionales o ensayos de cámara de Boyden. Sin embargo, estos experimentos no reflejan con precisión las condiciones fisiológicas o patológicas de un órgano enfermo. Para comprender mejor las interacciones entre el estroma tumoral o la matriz tumoral, los cultivos multicelulares y tridimensionales proporcionan herramientas más potentes para investigar la comunicación intercelular y la modulación del comportamiento de las células cancerosas dependiente de la MEC. Como plataforma para este tipo de estudio, presentamos un modelo experimental en el que las células cancerosas se cultivan en geles de colágeno embebidos con cultivos primarios de CAFs.

Introducción

El tejido canceroso puede percibirse como un tipo de órgano, que evoluciona a través de interacciones cercanas entre el cáncer y el microambiente del estroma tumoral, compuesto por fibroblastos asociados al cáncer (CAF), células inmunitarias, vasos tumorales y la matriz extracelular (MEC). Los CAF son la principal fuente de factores solubles (citocinas, factores de crecimiento y quimiocinas) que ejercen efectos mitogénicos, pro-migratorios y pro-invasivos sobre las células cancerosas. También estimulan la formación de vasos tumorales y reclutan células precursoras, como las células derivadas de la médula ósea (BMDC). Los CAF activados están implicados en la producción....

Protocolo

NOTA: Este estudio fue aprobado por los Comités de Ética apropiados.

1. cultivo primario de fibroblastos humanos de pulmón

1. Colección de tejido pulmonar:
   1. Obtener muestras de tejido de pulmón humano de la sala de operaciones quirúrgicas directamente. Recoger aproximadamente 1 cm ³ cuadras del tejido pulmonar canceroso y no canceroso, con la muestra no cancerosa recogido tan lejos de tumor posible.
   2. Suspender las muestras en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con 100 unidades / ml de penicilina, 100 mg / ml de estreptomicina y 0,25 mg / ml de anfotericina B (medio libre de suero....

Resultados

Este método de co-cultivo, imitando el microambiente tumoral, es una herramienta útil para investigar las interacciones entre las células cancerosas y los fibroblastos embebidos en geles de colágeno. En el estudio anterior, tres parámetros fueron evaluados en este modelo experimental: la contracción de gel de colágeno, la invasión de células de cáncer y el cambio morfológico. Proliferación de las células del cáncer se estimó utilizando también Ki67 inmunoticción ^4. Muestras de tejido pulmonar se recogieron a .......

Discusión

CAF forman un componente importante de la ECM que rodea las células del cáncer y no sólo proporcionan un andamio para el tumor, pero también participan activamente en el desarrollo del tumor ^7. La acumulación de pruebas revela el impacto de la CAF o sus moléculas relacionadas en el eventual pronóstico, destacando el papel fundamental de la progresión tumoral mediada por CAF ^8.

En el estudio anterior, hemos empleado el método consecuencia de aislar CAF pulmón ^4.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
DMEM	Sigma-Aldrich	D5796
FBS	GIBCO	10437
Colágeno tipo IA	Nitta gelatina Inc.	Tampón de reconstitución CELL-1A
	Nitta gelatin Inc.
Cubreobjetos	NUNC	174934
Grasa de silicona	Dow Corning Toray	Grasa
Dispasa I	WAKO	386-02271
Placa de 6 pocillos	BD Falcon	353046
Colador de células (70 μ m)	BD Halcón	352350

de alto vacío