Evaluación de tumor infiltrante de leucocitos subconjuntos en un modelo de tumor subcutáneo

Russell K. Pachynski; Alexander Scholz; Justin Monnier; Eugene C. Butcher; Brian A. Zabel

doi:10.3791/52657

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Artículo de método

Evaluación de tumor infiltrante de leucocitos subconjuntos en un modelo de tumor subcutáneo

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DOI:

10.3791/52657

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13 de abril de 2015

Russell K. Pachynski¹ , Alexander Scholz³ , Justin Monnier²^,³ , Eugene C. Butcher³ , Brian A. Zabel²

¹Division of Oncology, Department of Medicine, Washington University School of Medicine, ²Palo Alto Institute for Research and Education, Veterans Affairs Palo Alto Health Care System, ³Laboratory of Immunology and Vascular Biology, Department of Pathology, Stanford University School of Medicine

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe un método para la evaluación detallada de subconjuntos de leucocitos dentro del microambiente tumoral en un modelo tumoral de ratón. Las células de melanoma B16 que expresan quimerina se implantaron por vía subcutánea en ratones singénicos. A continuación, las células del microambiente tumoral se tiñeron y analizaron mediante citometría de flujo, lo que permitió realizar análisis detallados de subconjuntos de leucocitos.

Resumen

Células inmunes especializadas que se infiltran en el microambiente tumoral regulan el crecimiento y la supervivencia de neoplasia. Las células malignas deben eludir o subvertir las respuestas inmunitarias antitumorales con el fin de sobrevivir y prosperar. Los tumores se aprovechan de una serie de diferentes mecanismos de inmunidad "escape", incluyendo la contratación de tolerogénica DC, las células T reguladoras inmunosupresores (Treg), y células supresoras de origen mieloide (MDSC) que inhiben las respuestas antitumorales citotóxicos. Por el contrario, las células inmunes efectoras anti-tumor pueden ralentizar el crecimiento y expansión de tumores malignos: células dendríticas inmunoestimuladoras, células asesinas naturales que albergan la inmunidad anti-tumor innata, y células T citotóxicas todos pueden participar en la supresión de tumores. El equilibrio entre pro y anti-tumorales leucocitos determina en última instancia, el comportamiento y el destino de las células transformadas; una multitud de estudios clínicos en humanos han apoyado esto. Así, el análisis detallado de subconjuntos de leucocitos dentro deel microambiente tumoral se ha vuelto cada vez más importante. Aquí, se describe un método para el análisis de subconjuntos de leucocitos infiltrantes presentes en el microambiente tumoral en un modelo de tumor de ratón. Las células tumorales de melanoma de ratón B16 se inocularon por vía subcutánea en ratones C57BL / 6. En un momento determinado, los tumores y la piel circundante fueron resecadas en bloque y se procesan en suspensiones de células individuales, que luego se tiñeron de múltiples colores citometría de flujo. Usando una variedad de marcadores de subconjuntos de leucocitos, hemos sido capaces de comparar los porcentajes relativos de la infiltración de subconjuntos de leucocitos entre el control y los tumores chemerin expresan. Los investigadores pueden utilizar una herramienta para estudiar la presencia inmune en el microambiente tumoral y cuando se combina con mediciones del tamaño de la pinza tradicionales de crecimiento del tumor, potencialmente les permita dilucidar el impacto de los cambios en la composición inmunológico sobre el crecimiento tumoral. Dicha técnica se puede aplicar a cualquier modelo de tumor en el que el tumor y su microambiente cun ser resecados y procesados.

Introducción

El equilibrio entre el crecimiento del tumor y la promoción y la regresión es, en parte, depende de la balanza de leucocitos infiltrantes de tumores favor y en contra presentes en el microambiente ^1,2. Con el fin de estudiar el microambiente tumoral (TME) y, específicamente, identificar las subpoblaciones de leucocitos de infiltración, hemos desarrollado un método para la evaluación de tumores subcutáneos en un modelo de tumor murino. La importancia de estudiar el microambiente tumoral es bien conocido y apoyado en la literatura. Numerosos estudios han demostrado que el equilibrio de las células inmunes pro- y anti-infiltrantes de tumores puede afectar los....