Prolongado lapso de tiempo intravital de imágenes de tiempo real multicelular Dinámica en el microambiente tumoral

Allison S. Harney; Yarong Wang; John S. Condeelis; David Entenberg

doi:10.3791/54042

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Artículo de método

Prolongado lapso de tiempo intravital de imágenes de tiempo real multicelular Dinámica en el microambiente tumoral

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DOI:

10.3791/54042

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12 de junio de 2016

Allison S. Harney¹^,²^,³^,⁴ , Yarong Wang¹^,³ , John S. Condeelis¹^,³^,⁴ , David Entenberg¹^,³^,⁴

¹Department of Anatomy & Structural Biology, Albert Einstein College of Medicine, ²Department of Radiology, Albert Einstein College of Medicine, ³Gruss-Lipper Biophotonics Center, Albert Einstein College of Medicine, ⁴Integrated Imaging Program, Albert Einstein College of Medicine

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe el uso de la microscopía multifotónica para realizar extendida time-lapse de las interacciones multicelulares en tiempo real, en vivo a una resolución de una sola célula.

Resumen

En el microambiente tumoral, las células estromales del huésped interactúan con las células tumorales para promover la progresión tumoral, la angiogénesis, la diseminación de las células tumorales y la metástasis. Las interacciones multicelulares en el microambiente tumoral pueden dar lugar a eventos transitorios, como la motilidad direccional de las células tumorales y la permeabilidad vascular. La cuantificación de la permeabilidad vascular tumoral ha utilizado con frecuencia experimentos de punto final para medir la extravasación de tintes vasculares. Sin embargo, debido a la naturaleza transitoria de las interacciones multicelulares y la permeabilidad vascular, no se puede discernir la cinética de estos eventos dinámicos. Al marcar las células y la vasculatura con tintes inyectables o proteínas fluorescentes, la microscopía intravital de lapso de tiempo de alta resolución ha permitido la visualización directa y en tiempo real de eventos transitorios en el microambiente tumoral. Aquí describimos un método para usar la microscopía multifotónica para realizar imágenes intravitales extendidas en ratones vivos para visualizar directamente la dinámica multicelular en el microambiente tumoral. Este método detalla las estrategias de marcaje celular, la preparación quirúrgica de un colgajo de piel mamaria, la administración de colorantes inyectables o proteínas mediante catéter de vena de cola y la adquisición de imágenes de lapso de tiempo. Las secuencias time-lapse obtenidas a partir de este método facilitan la visualización y cuantificación de la cinética de los eventos celulares de motilidad y permeabilidad vascular en el microambiente tumoral.

Introducción

La difusión de células tumorales de tumor de mama primario se ha demostrado que la participación células tumorales no sólo, pero el anfitrión de las células del estroma incluyendo los macrófagos y células endoteliales. Además, la vasculatura del tumor es anormal con aumento de la permeabilidad ^1. Por lo tanto, la determinación de cómo las células tumorales, los macrófagos y las células endoteliales interactúan para mediar en la permeabilidad vascular y intravasación de células tumorales en el microambiente del tumor primario es importante para entender la metástasis. La comprensión de la cinética de la permeabilidad vascular, la intravasación de células tu....