La Preparación de oblicua de la médula espinal ventral de segmentos para Root Estimulación

Summary

Mostramos cómo preparar rodajas oblicuas de la médula espinal en ratones jóvenes. Esta preparación permite la estimulación de las raíces ventrales.

Abstract

Registros electrofisiológicos de láminas de médula espinal han demostrado ser una técnica valiosa para investigar una amplia gama de preguntas, de celular a las propiedades de red. Mostramos cómo preparar rodajas oblicuas viables de la médula espinal de ratones jóvenes (P2 - P11). En esta preparación, las motoneuronas conservan sus axones que sale de las raíces ventrales de la médula espinal. La estimulación de estos axones provoca back-propagan los potenciales de acción que invaden el somas de las neuronas motoras y emocionantes colaterales el motoneuronas en la médula espinal. Grabación de potenciales de acción antidrómicos es una forma inmediata, definitiva y elegante para caracterizar la identidad de las neuronas motoras, que supera a otros métodos de identificación. Además, la estimulación de las neuronas motoras colaterales es una manera simple y fiable para excitar los objetivos colaterales de las neuronas motoras en la médula espinal, tales como otros motoneuronas o Renshaw células. En este protocolo, se presentan grabaciones antidrómicos de la motoneurona somas, así como excitación de la célula de Renshaw, resultante de la estimulación de la raíz ventral.

Introduction

Históricamente, las grabaciones motoneuronas utilizando Sharp-electrodo se llevaron a cabo in vivo en animales grandes tales como gatos o ratas ¹ o en una médula espinal enteros aislados en ratones ^2. La aparición de la técnica de grabación de patch-clamp durante la década de 1980, llamado por el acceso directo a la motoneurona somas como el sellado necesario para conseguir bajo control visual. Por lo tanto, la preparación de la rebanada de la médula espinal se ha logrado fácilmente desde principios de 1990 ^3. Sin embargo, rebanada preparación temprana a menudo no permitía la estimulación de las raíces ventrales. A lo mejor d....

Protocol

Los experimentos se realizaron de acuerdo con las directivas europeas (86/609 / CEE y 2010 a 63-UE) y la legislación francesa, y fueron aprobados por el comité de ética de la Universidad de París Descartes.

1. Preparación de la rebanada de la médula espinal

1. Preparar las siguientes soluciones diarias o un día de antelación. Si se mantiene durante toda la noche, la burbuja con un 95% _{de O2} y 5% de _CO2 y mantener refrigerado en frascos bien cerrados.
   1. Prepare baja Na ⁺ fluido cefalorraquídeo artificial (ACSF): KCl 3 mM, 1 mM NaH ₂ PO _4, sacarosa 230 mM....

Results

La confirmación de la identidad Motoneuron base de los potenciales de acción antidrómica

La orientación de la célula

Motoneuronas se encuentran en el cuerno ventral (visible en rojo en la figura 2C). Comience desde el haz de axones que forman la raíz ventral y subir hasta que el haz se dispersa completamente y uno com.......

Discussion

rebanar oblicua de la médula espinal es importante ya que permite la estimulación unilateral de piscinas de neuronas motoras y las células de Renshaw en un solo segmento vertebral de una manera fiable, completa y específica. Además, se permite una identificación rápida, elegante y no ambigua de las motoneuronas grabados. A continuación, vamos a destacar las ventajas de esta técnica en comparación con otros métodos de preparación rebanada, y luego vamos a insistir en las trampas más comunes a evitar al realizar este proc.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Na-quinurenato	ABCAM	ab120256	se disuelve mejor que otras marcas
KCl	Sigma	P3911
NaH2PO4	Sigma	P5655
sacarosa	Sigma	S9378
NaHCO3	Sigma	S6014
CaCl2	G Biosciences	R040
MgCl2	Calidad Biológica	351-033-721
glucosa	Sigma	G5767
ácido ascórbico	Sigma	A5960
Na-piruvato	Sigma	P2250
K-gluconato	Sigma	P1847
EGTA	Sigma	E3889
HEPES	Sigma	H4034
NaCl	Sigma	S9888
Agar	Sigma	A9799
QX-314	Alomone	Q150
Mg-ATP	Sigma	A9187
CsOH	Sigma	232041
Na-GTP	Sigma	51120
ácido glucónico	Sigma	G1951
Solución de hidróxido de cesio	Sigma	232041
KOH	Sigma	P5958
Tijeras de resorte Vannas - 2,5 mm	FST	15000-08	solo se usa para cortar la duramadre, podría dañarse si se cortan los huesos
Estimulador	A-M Systems	Estimulador de Pulso Aislado Modelo 2100
Vibratome	Campden	Microtomo Vibratorio 7000 - Modelo 7000SMZ-2