La cuantificación histológica de miocardio infarto crónico en ratas

Resumen

La evaluación post-mortem del infarto de miocardio (IM) en roedores se basa en la cuantificación del infarto en secciones de corazón teñidas. Describimos un método preciso para cuantificar el tamaño del infarto utilizando el muestreo sistemático de corazones de rata recolectados desde la base hasta el ápice y análisis de imágenes de secciones histológicas teñidas con tricrómicos.

Resumen

El infarto de miocardio se define como la muerte de los cardiomiocitos debido a una isquemia prolongada; una respuesta inflamatoria y la formación de cicatrices (fibrosis) siguen a la lesión isquémica. Tras la fase aguda inicial, la remodelación crónica del ventrículo izquierdo (VI) modifica la estructura y la función del corazón. La ligadura coronaria permanente en pequeños animales ha sido ampliamente utilizada como modelo de referencia para un modelo crónico de IM. El adelgazamiento de la pared infartada evoluciona progresivamente a fibrosis transmural. La evaluación histológica del tamaño del infarto se realiza comúnmente; Sin embargo, falta una estandarización de los métodos de cuantificación. De hecho, aspectos metodológicos importantes, como el número de secciones analizadas y los métodos de muestreo y cuantificación, generalmente no se describen y, por lo tanto, impiden la comparación entre investigaciones. Con demasiada frecuencia, la cuantificación se realiza en una sola sección obtenida a nivel de los músculos papilares. Debido a que se están investigando nuevas estrategias destinadas a reducir la expansión y remodelación del infarto, existe una necesidad importante de estandarizar protocolos precisos de muestreo cardíaco. Describimos un método preciso para cuantificar el tamaño del infarto utilizando un muestreo sistemático de corazón de rata recolectado y análisis de imágenes de secciones histológicas teñidas con tricrómata obtenidas desde la base hasta el ápice. También aportamos evidencias de que el cálculo del índice de expansión (IE) permitió evaluar el tamaño del infarto, teniendo en cuenta los cambios del ventrículo izquierdo a lo largo de la remodelación.

Introducción

El infarto de miocardio (IM) es una causa principal de muerte y discapacidad en todo el mundo. La enfermedad coronaria es la causa principal; MI resulta de la isquemia consecutiva a eventos coronarios tales como oclusión. Cuando la reperfusión no se realiza dentro de las primeras 6 horas, la isquemia induce necrosis miocárdica irreversible. En los pacientes, la caracterización de MI se apoya en diferentes herramientas de diagnóstico, incluidos los signos clínicos, la electrocardiografía, la evaluación de los niveles plasmáticos de biomarcadores, ecocardiografía, resonancia magnética y análisis histológicos ^1. MI aguda y crónica se clasifican como dos fases....

Protocolo

Todos los animales recibieron atención humanitaria de conformidad con la Convención Europea de los Animales. Los procedimientos quirúrgicos se realizaron de conformidad con la Ley de Protección de Animales de Suiza después de obtener el permiso de la Oficina Veterinaria del Estado, Friburgo, aprobado por la Oficina Veterinaria Federal Suizo, Suiza.

1. La recolección del corazón

NOTA: Todas las intervenciones quirúrgicas se realizaron bajo anestesia con isoflurano. Se hicieron esfuerzos para disminuir el sufrimiento de los animales. En particular, todos los animales recibieron una inyección subcutánea de 0,1 mg /....

Resultados

Seis semanas después de la ligadura de LAD, los corazones se recogieron de ratas Lewis. secciones de tejido de 2 mm se obtuvieron de vértice a la base. Un procedimiento de tinción de TTC se realizó para visualizar el área de infarto, que aparece en blanco, y el miocardio sano, que aparece en rojo (Figura 2). Dependiendo del sitio de la ligadura de la LAD, el tamaño del infarto varía. Para grandes MI, se observaron infartos transmurales desde el vértice a la base .......

Discusión

Los pasos críticos dentro del Protocolo

tejido fibrótico puede evaluarse con precisión en un modelo de rata MI crónica utilizando muestreo sistemático del corazón y de la imagen cosechada análisis de secciones histológicas-tricromáticas manchado obtenidos a partir de la base al ápice. Dos pasos son especialmente importantes para el éxito de la implementación del protocolo. En primer lugar, el uso de KCl para la recolección del corazón permite que el músculo cardíaco se mante.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Matriz acrílica de corazón de rata 2 mm	72-5015	Harvard Appartus
Inspira ventilador avanzado controlado por volumen	Harvard Apparatus 557058
Catéter Insyte 14 G	BD	381267
O.C.T	BDHA361603E	VWR
TTC	T8877-10G	Sigma Aldrich
Mayer hematoxilina	MHS32-1L	Sigma Aldrich
Ácido Fucsina CI 42685	F8129-50G	Sigma Aldrich
Ponceau Xilidina CI 16150	P2395-25G	Sigma Aldrich
Naranja G CI 16230	O3756-100G	Sigma Aldrich
Verde claro CI 42095	L5382-25G	Sigma Aldrich
KCl	P9333-500G	Sigma Aldrich
Xylol	10315083	HoneyWell
Etanol absoluto	10303990	HoneyWell
2-metilbutano	M32631-1L	Sigma Aldrich
Microscopio estereoscópico	SM2800	Nikon
Formaldehído	99340	Reactolab
Casete de inclusión	K113.1	Carl Roth
Bersoft Software		Bersoft.com	Software con licencia

de medición de imágenes