Un Protocolo Automatizado Rápido de Fibra Análisis Población en músculo de rata Secciones representativas Uso de la cadena pesada de miosina inmunohistoquímica

Konstantin D. Bergmeister; Marion Gröger; Martin Aman; Anna Willensdorfer; Krisztina Manzano-Szalai; Stefan Salminger; Oskar C. Aszmann

doi:10.3791/55441

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Un Protocolo Automatizado Rápido de Fibra Análisis Población en músculo de rata Secciones representativas Uso de la cadena pesada de miosina inmunohistoquímica

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DOI:

10.3791/55441

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28 de marzo de 2017

Konstantin D. Bergmeister¹^,³ , Marion Gröger² , Martin Aman¹ , Anna Willensdorfer¹ , Krisztina Manzano-Szalai¹ , Stefan Salminger¹ , Oskar C. Aszmann¹

¹CD Laboratory for the Restoration of Extremity Function, Division of Plastic and Reconstructive Surgery, Department of Surgery, Medical University of Vienna, ²Core Facility Imaging, Core Facilities, Medical University Vienna, ³Department of Hand, Plastic and Reconstructive Surgery, Burn Center, BG Trauma Center Ludwigshafen, Plastic and Hand Surgery, University of Heidelberg

En este artículo

Resumen

Aquí, se presenta un protocolo para análisis rápido de la fibra muscular, lo que permite mejorar la calidad de la tinción, y la adquisición de ese modo automático y la cuantificación de las poblaciones de fibra utilizando el ImageJ software disponible libremente.

Resumen

La cuantificación de las poblaciones de fibras musculares proporciona una visión más profunda de los efectos de la enfermedad, trauma, y varias otras influencias sobre la composición de músculo esquelético. Varios métodos que requieren mucho tiempo se han utilizado tradicionalmente para estudiar las poblaciones de fibra en muchos campos de la investigación. Sin embargo, recientemente desarrollado métodos inmunohistoquímicos sobre la base de la miosina expresión de la proteína de cadena pesada de proporcionar una alternativa rápida para identificar múltiples tipos de fibra en una sola sección. A continuación, se presenta un protocolo rápido, fiable y reproducible para mejorar la calidad de la tinción, lo que permite la adquisición automática de las secciones transversales integrales y cuantificación automática de las poblaciones de fibra con ImageJ. Para este propósito, los músculos esqueléticos incrustadas se cortan en secciones transversales, teñidas utilizando miosina anticuerpos cadenas pesadas con anticuerpos fluorescentes secundarias y DAPI para la tinción de núcleos de células. secciones transversales enteras se escaneados automáticamente usando un escáner de diapositivas para obtener de alta resolución compuestoimágenes de la muestra completa. análisis de población de fibra se llevan a cabo posteriormente para cuantificar fibras lentas, intermedias y rápidas utilizando una macro automatizado para ImageJ. Hemos demostrado anteriormente que este método puede identificar poblaciones de fibra de forma fiable a un grado de ± 4%. Además, este método reduce la variabilidad inter-usuario y la hora por los análisis significativamente utilizando la plataforma ImageJ de código abierto.

Introducción

Composición del músculo esquelético sufre cambios profundos durante los procesos fisiológicos tales como el envejecimiento ^{^1,} ^2, ejercicio ^{^3,} ^{^4,} ^{^5,} ^{^6,} ^7, o procesos fisiopatológicos tales como la enfermedad ^{^8,} ^{^9,} ¹⁰ o trauma ^11. Por lo tanto, varios campos de investigación se concentran en los efectos estructurales de estos procesos....