Modelo murino de inflamación inducida por Pentylenetetrazole

Summary

Este protocolo describe un método de química inflamación con pentylenetetrazole y proporciona un modelo de ratón de la epilepsia. Este protocolo también puede utilizarse para investigar la vulnerabilidad a la inducción de convulsiones y de la patogenesia después de las crisis epilépticas en los ratones.

Abstract

Pentylenetetrazole (PTZ) es un antagonista del receptor GABA-A. La inyección intraperitoneal de PTZ en un animal induce una convulsión aguda, severa a una dosis alta, mientras que las inyecciones secuenciales de una dosis de subconvulsive se han utilizado para el desarrollo de la química, Yesca, un modelo de epilepsia. Una sola inyección de dosis bajas de PTZ induce una convulsión leve sin convulsión. Sin embargo, repetidas inyecciones de dosis bajas de PTZ disminuyen el umbral para evocar un ataque convulsivo. Por último, la administración continua de dosis bajas de PTZ induce una severa convulsión tónico-clónica. Este método es simple y ampliamente aplicable a investigar la patofisiología de la epilepsia, que se define como una enfermedad crónica que involucra convulsiones repetitivas. Este producto químico Yesca protocolo causa convulsiones repetitivas en animales. Con este método, se estimó la vulnerabilidad a ataques de PTZ-mediada o el grado de agravación de las crisis epilépticas. Estas ventajas han llevado a la utilización de este método para la detección de drogas antiepilépticas y genes relacionados con la epilepsia. Además, este método se ha utilizado para investigar daño neuronal después de ataques epilépticos debido a los cambios histológicos observados en los cerebros de pacientes epilépticos también aparecen en los cerebros de animales encendido química. Así, este protocolo es útil para la producción conveniente de modelos animales de epilepsia.

Introduction

La epilepsia es un trastorno neurológico crónico que se caracteriza por convulsiones recurrentes y afecta aproximadamente al 1% de las personas. Los mecanismos subyacentes de generación epileptogénesis y convulsiones en pacientes con epilepsia no pueden ser totalmente clarificados en estudios clínicos. Por lo tanto, un modelo animal apropiado es necesario para el estudio de la epilepsia¹.

Una gran variedad de modelos animales de epilepsia se han utilizado para investigar la fisiología de la epilepsia y para identificar los fármacos antiepilépticos^2,3. Entre e....

Protocol

Todos los procedimientos experimentales fueron aprobados por el cuidado Animal y uso de la Tokyo Metropolitan Instituto de ciencias médicas. 8 postnatal - ratones de 16 semanas de edad se recomiendan. Cualquier cepa consanguínea es aceptable para el experimento. Ratones C57BL/6 son más resistentes a PTZ, que ratones albinos BALB/c y Suiza son más sensibles a PTZ. C57BL/6 fueron utilizados en este estudio. Vulnerabilidad a PTZ también depende de la edad del ratón. En comparación con ratones pequeños, ratones más viejos son más refractarios a PTZ³⁵. El número de animales usados para este método puede variar, pero por lo menos 6 a 10 animales se r....

Results

Inyección repetitiva de PTZ induce un aumento en la severidad de convulsiones. Seis ratones C57BL/6 fueron tratados con PTZ, y otro 6 ratones fueron tratados con solución salina como grupo de control. La dosis PTZ fue de 35 mg/kg, y 10 inyecciones fueron administradas. La puntuación de ataque aumentó gradualmente con inyecciones de PTZ, considerando que no hay ataques o comportamientos anormales fueron evocados por las inyecciones de solución Salinas (figura 2

Discussion

Aquí, presentamos un protocolo ampliamente accesible para el establecimiento de un modelo farmacológico de la epilepsia. Inflamación química mediada por PTZ tiene una larga historia y es un modelo comúnmente aceptado para el estudio de la patología celular y la histopatología de epilepsia⁴¹. El modelo de inflamación química de la epilepsia ha sido revisado previamente por Suzdak y Jansen, 1995⁴². Inducción de convulsiones farmacológicas, especialmente con PTZ, es un método .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Pentilenetetrazol	Sigma-Aldrich	P6500
Cloruro de sodio	MANAC	7647-14-5
Ratón	CLEA Japón		C57Bl/6NJcl, postnatal 8 semanas, macho
Jeringa (1mL)	Terumo	SS-01T
Aguja (27G x 3/4") (0.40 x 19 mm)	Terumo	NN-2719S
Báscula de pesaje	Mettler	PE2000	Este artículo es un producto descatalogado. Casi equivalente a FX-2000i con FXi-12-JA de A& D empresa.
Paraformaldehído	Sigma-Aldrich	P6148
Hidróxido de sodio	nacalai tesque	31511-05
Bomba peristática	ATTO	SJ1211
Sacarosa	nacalai tesque	30404-45
Microtomo	Yamato	REM-700	Este artículo es un producto descatalogado. Casi equivalente a REM-710
Hoja de micrótomo	Feather	S35
Triton X-100	Sigma-Aldrich	X-100
anti-sinaptoporina	Sistemas sinápticos	102 002
anticuerpo anti-ZnT3	Sistemas sinápticos	197 002
anti-doblecortina	Santa Cruz	sc-8066	Este artículo es un producto descontinuado. No probamos el producto equivalente (sc-271390).
Aparato de prueba de discriminación de miedo contextual	O'hara
Aparato de prueba de tres cámaras	Muromachi