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Artículo de método

Trasplante de células madre derivadas de tejido adiposo hoja para reducir fugas después de colectomía parcial en un modelo de rata

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DOI:

10.3791/57213

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11 de agosto de 2018

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En este artículo

Resumen

Se presenta la preparación y el trasplante de tejido adiposo derivado de la célula de vástago (ASC) hojas en anastomosis colorrectales suficientemente suturadas en un modelo de rata. Esta aplicación novedosa muestra que hojas ASC pueden reducir la fuga de la anastomosis colorrectal.

Resumen

Fuga anastomótica es una complicación catastrófica después de la cirugía colorrectal. Aunque los métodos actuales para la prevención de fugas tienen diferentes niveles de eficacia clínica, son hasta ahora imperfectas soluciones. Terapia de células madre utilizando hojas de ASC podría proporcionar una solución a este problema. ASCs son considerados como prometedores candidatos para promover tejido de cicatrización debido a sus propiedades tróficas e inmunomoduladores. Aquí, ofrecemos métodos para producir alta densidad hojas ASC, que se trasplantan en una anastomosis colorrectal en un modelo de rata para reducir la fuga. ASCs forman hojas celular en platos termo-sensible de la cultura que pueden ser desmontados fácilmente. En el día del transplante, se realizó una colectomía parcial con una 5-sutura en la anastomosis colorectal. Los animales fueron trasplantados inmediatamente con 1 hoja ASC por rata. Hojas ASC se adhirieron espontáneamente a la anastomosis sin ninguÌ n pegamento, sutura o cualquier biomaterial. Grupos de animales fueron sacrificados 3 y 7 días después de la operación. Comparado con animales trasplantados, la incidencia de abscesos anastomóticos y la salida fue mayor en los animales control. En nuestro modelo, el trasplante de hojas ASC después de anastomosis colorrectal era acertado y asociado con una menor tasa de salida.

Introducción

Colectomía parcial con una anastomosis primaria es una cirugía comúnmente realizada que se puede hacer para muchas enfermedades que afectan el colon como el cáncer colorrectal, enfermedad de Crohn y diverticulitis1,2. La más temida complicación después de la fuga anastomótica3anastomosis colorrectal. Aunque se han identificado varios factores de riesgo asociados a fugas anastomóticas, soluciones para la prevención de fugas siguen siendo desconocido4,5.

Células estromales derivadas de tejido adiposo (A....

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Protocolo

El tejido adiposo abdominal subcutáneo se obtuvo de donantes humanos con la aprobación de la Comisión de ética médica (#MEC-2014-092), Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Holanda. Todos los experimentos en animales fueron aprobados por el Comité ético de Experimentación Animal, Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Países Bajos (133-14-01).

1. cultivo y aislamiento de ASCs humano

  1. Preparar 3 mL de medio de aislamiento de 1 g de tejido adiposo. Glucosa baja mezcla Dulbecco de medio de Eagle modificado (LG-DMEM) con bovinos de 10 g/L albúmina sérica (BSA) y la colagenasa 1 g/L tipo 1.
  2. Disecar el teji....

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Resultados

Un diagrama de flujo de este estudio que representa el cultivo de hoja ASC y el procedimiento de resección del colon y la anastomosis se muestra en la figura 1. La figura 2 muestra la morfología microscópica de la hoja ASC y el aspecto macroscópico de la hoja ASC durante y después de la separación. La figura 3 muestra los diferentes pasos de desprendimiento de la hoja ASC y trasplante.

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Discusión

Fuga anastomótica es el evento adverso más grave después de la resección de colon con una anastomosis primaria. Técnicas óptimas para evitar fugas y disrupción anastomótica siguen faltando. Aplicación local de una amplia gama de biomateriales se ha realizado, con distintos resultados25,26,27. El objetivo de las terapias de la célula es facilitar la reparación de los tejidos por el reemplazo del tejido o la estimulación de la cur.......

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Divulgaciones

Los autores declaran que la investigación se llevó a cabo en ausencia de cualquier relación comercial o financiera que pueda interpretarse como un potencial conflicto de interés.

Agradecimientos

Los autores agradecemos al Prof. Dr. S.E.R. Hovius, Dr. m.a.m. Mureau y todos los cirujanos del Departamento de cirugía plástica de la colección del tejido adiposo subcutáneo. P. Sukho es apoyado por una beca del programa de la comunidad de Países Bajos (NFP-12/435), durante la realización del estudio. Y.M. Bastiaansen-Jenniskens es apoyado por becas de la fundación holandesa de artritis (LP11).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
LG DMEMGibco, Life technologies22320022Aislamiento y cultivo
ASC Colagenasa tipo IGibco, Life technologies17100-01ASC Aislamiento
Albúmina sérica bovinaSigma-AldrichA9418ASC Aislamiento
Suero fetal bovinoGibco, Life technologies10270-106FBS, ASC aislamiento y cultivo
3% acético ácido con azul de metilenoStemcell Technologies7060Aislamiento ASC
GentamicinaGibco, Life technologies15750-037Aislamiento y cultivo de ASC
Antotericina BGibco, Life technologies15290-018Agitador de aislamiento y cultivo de ASC
(Agitador ambiental Gallenkamp modelo 10X 400)Aislamiento
Akribis Scientific F240 ASCCentrífugaHettichlabRotina380Aislamiento y cultivo de ASC
Tampón de fosfato salinoGibco, Life technologies14190-094Aislamiento y cultivo de PBS, ASC
Ácido ascórbico-2-fosfatoSigma-AldrichA8960Aislamiento y cultivo de ASC
Factor de crecimiento de fibroblastos recombinantes humanos 2AbD SerotecAF-100-15FGF2, aislamiento y cultivo de ASC
Tripsina EDTAGibco, Life technologies25200-056Cultivo ASC
Sulfóxido de dimetiloSigma-AldrichD2650-5xDMSO, congelación ASC
Placas de cultivo termosensiblesNunc Preparaciónsábanas Thermo174904
Seda trenzada no absorbible 4/0B Braun21151042cirugía
Monofilamento no absorbible poliamida 8/0B BraunG1118170 surgery
Ácido poliglicólico trenzado reabsorbible 5/0B BraunC1048207surgery
de de scientific ASC

Referencias

  1. Kawahara, H., et al. Single-incision laparoscopic right colectomy for recurrent Crohn's disease. Hepatogastroenterology. 57 (102-103), 1170-1172 (2010).
  2. Saia, M., Buja, A., Mantoan, D., Agresta, F., Baldo, V. Colon Cancer Surger....

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Reimpresiones y permisos

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