절단 및 파라핀 끼워 넣어진 조직 단면에 대 한 부동 방법

Summary

여기, 선물이 파라핀 단면 개선 하는 프로토콜. 이 메서드는 절단 하 고 종래의 방법에 필요한 전송 프로세스를 피하기 위해 간단한 온도 챔버를 사용 하 여 부동을 결합 합니다. 그 결과, 효율과 그대로 파라핀 섹션 수가 크게 개선 했다.

Abstract

파라핀 끼워 넣어진 조직의 단면 조직학 및 병 리에 널리 사용 됩니다. 그러나, 그것은 지루한입니다. 이 방법을 개선 하기 위해, 여러 상업 회사 유체 물을 사용 하 여 복잡 한 섹션 전송 시스템을 고안 했다. 단순화 하기 위해이 기술을, 우리가 만든 결합 절단 및 간단한 항 온 챔버; 내 부동 수 제 장비를 사용 하 여 간단한 방법 따라서, 섹션 자동으로 물 표면에 물 목욕을 입력합니다. 성인 쥐 두뇌, 성인 마우스 신장, 배아 마우스 두뇌, 및 성인 zebrafish 눈에서 해 마는 비교에 대 한 전통적인 파라핀 단면 및 제시 방법 모두를 사용 하 여 절단 했다. 통계 분석이 보여줍니다 우리의 개선된 방법 시간을 저장 하 고 높은 품질 섹션을 생산. 또한, 짧은 시간에 전체 견본의 파라핀 단면 주니어 연산자에 대 한 쉽습니다.

Introduction

형태학 연구 생물학 연구에서 중요 하다입니다. 새로운 기술 얼룩 뒤에 그들의 목표는 전체 조직 또는 생물^1,2,3, 얇은 섹션으로는 시료를 절단에서 직접 관찰 하는 연구를 허용 했다, 남아 있다 기본 메서드 fornot 유일한 조직 형태 뿐만 아니라 조직에서 직접 대상으로 하는 단백질. 가벼운 현미경 검사 법 사용 하 여 세 가지 섹션 유형: 파라핀, 냉동, 그리고 semithin. 비록 cryosectioning 조직 antigenicity을 보호 하는 것이 일반적 이며 견본 준비는 간단 하다, 가난 하 고 얇은 단면^4,5에 대 한 부적 절 한 유지 조직 형태가 이다. 파라핀 단면 전시 잘 보존 된 형태에 대 한 가장 자주 사용 되는 방법입니다. 표본은 완전히 탈수 하 고 왁 스에 포함 된, 파라핀 블록 무기한으로 저장할 수 있습니다. 또한, 파라핀 단면 얇은 섹션 추가 실험에서 생물학 프로브 액세스를 개선 하 고 셀 레이어 오버레이 Z 방향으로 감소 생산 합니다.

그러나, 전통적인 파라핀 단면 지루한 이며 연산자 기술 요구. 파라핀 섹션에는 고정, 탈수, 포함, 절단, 그리고 떠 받 다. 중요 한 것은, 물 목욕을 칼 홀더에서 섹션 리본 전송은 필요 하지만 어려운 주니어 연산자에 대 한입니다. 건조 한 공기에 (서) 특히 섹션 리본 정전기 때문 트위스트 것과 따뜻한 물 표면에 전개 하기 어렵습니다. 섹션을 개선 하기 위해 품질, 얼음 물에 immersing 또는 톰 근처 가습기로 습도 올리는 왁 스 블록을 냉각 톰 블레이드 가공 패스 사이의 노출 된 조직 표면에 보습^6,7 권장 . 파라핀 단면을 개선 하기 위한 새로운 방법 등 하이브리드 파라핀 포함, cryosectioning⁸, 상업 섹션 전송 시스템 지원⁹. 비록 이러한 방법을 부분적으로 파라핀을 개선 속도 품질, 단면 그들은 단면 훨씬 더 복잡 하 고, 만들고 상업 섹션 전송 시스템은 비싼.

이 프로토콜을 로타리 톰의 블레이드 홀더에 연결 될 수 있는, 저렴 한 간단 하 고 유연한 장비 단계를 만드는 방법을 보여 줍니다. 이 장비는 구성 섹션 채널, 물 목욕, 온도 감지 스위치 히터. 절단 후, 섹션의 수십 섹션 채널을 흘러 하 고 따라서 자동으로 펼쳐지고 직접 물 목욕을 입력 합니다. 이 파라핀 단면 효율을 향상 하 고이 기술을 더 편리 하 게. 이 방법, 더 성인 마우스 hippocampal 섹션, 성인 마우스 신장 섹션, 배아 15.5 일 된 (E15.5) 마우스 뇌 섹션, 및 섹션 짧은 시간에 수확 하 고 형태학 상으로 더 온전 하 게 남아 있었다 성인 zebrafish 눈을 사용 하 여. 이 메서드는 또한 가속된 파라핀 섹션 구별의 손실을 피하 면 서 단면 필요로 하는 다른 조직 샘플에 대 한 사용할 수 있습니다.

Protocol

여기에 설명 된 모든 방법은 동물 관리 및 사용 위원회의 남 창 대학에 의해 승인 되었습니다가지고. 1. 장비를 조립 하 고는 톰을 연결 디자인 요구 사항 (보충 그림 1) 당 매개 변수. 아크릴 보드 제조에 현지 공장에 매개 변수를 제출 합니다. 순서 대로 모든 부품을 조립: 클로 프롬을 사용 하 여 결합 7 상업 아크릴 보?…

Representative Results

개선된 방법 그대로 파라핀 섹션의 수를 증가 했다. 성인 마우스 hippocampal 조직, 성인 마우스 신장, 배아 마우스 두뇌, 그리고 zebrafish 눈에이 새로운 방법을 테스트 했습니다. 물 탱크에 추가 되었다 그리고 40.0 ° c 38.0 ° C 사이 수 온 유지 되었다 순차적으로 준비 후 조직 샘플, 그들은 구분 하 고 기존의 단면에 비해 했다. 새로운 메서드는 섹션 손실을 피할 하 고 성인 마우…

Discussion

파라핀 섹션 형태를 개선 하 고 기존의 파라핀 단면 동안 시간을 낭비의 문제를 해결, 우리는 향상 된 파라핀 단면 절단 및 전개 방법을 만들었습니다. 이 향상 된 방법은 간단한 장비 섹션 채널, 물 목욕, 온도 감지 스위치 히터에 의존 합니다. 섹션 리본 섹션 채널을 통해 물 목욕을 입력 하 고 자동으로 절단 하는 동안 펼쳐져. 따라서,이 방법은 파라핀 품질과 효율성, 파라핀 성인 마우스 해 마, ?…

Materials

Incubator	Boekel Scientific	133000-2
Ethanol	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid	64-17-5
Xylene	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid	1330-20-7
Paraplast	Leica	39601006
Heated Paraffin Embedding Module	Leica
Commercial acrylic board
Trichloromethane	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid	67-66-3
Tubular electric heating element(12V 200W)
Temperature controller(12v 120w)	Mingsuo	XH-W3002
Rotary microtome	Leica
Neutral silicone sealant			Link the water channel with the microtome knife holder
Voltage transformer	Dearll	S-250-12
Disposable blade	Accu-Edge	4689
Hematoxylin	Baso Diagnostics Inc.	BA-4025
Eosin	Baso Diagnostics Inc.	BA-4025
Microslide	Sail Brand	7105
Neutral balsam	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid	10004160
Coverslip	Citoglas	10212424C
Microscope	Carl Zeiss
Hydrochloric acid	Xilong Chemical	7647-01-0
Water bath for paraffin sections	Leica
HistoCore Arcadia C - Cold Plate	Leica
paraffin repellent spray	Thermo Scientific	9990420