Ortotópico inyección de las células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria de ratones
Summary
Aquí, presentamos un protocolo para implantar las células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria de manera sencilla, menos forma invasiva y fácil de manejar, y este modelo Murino ortotópico mama cáncer con un entorno de almohadilla de grasa mamaria adecuada puede utilizarse para investigar diversos aspectos de la cáncer.
Abstract
Un modelo animal adecuado es crucial para una mejor comprensión de las enfermedades. Animal modelos establecidos por diferentes métodos (inyecciones subcutáneas, xenoinjertos, manipulación genética, inducción de reactivos químicos, etc.) tienen varios caracteres patológicos y desempeñar un papel importante en la investigación de ciertos aspectos de enfermedades. Aunque no hay un modelo único puede mímico totalmente la progresión de la enfermedad humana toda, modelos de enfermedad de órganos ortotópico con un adecuado ambiente estromal juegan un papel insustituible en la comprensión de enfermedades y detección de posibles fármacos. En este artículo describimos cómo implantar las células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria de manera sencilla, menos manera invasiva y fácil de manejar y siga la metástasis a órganos distantes. Con las características adecuadas de crecimiento del tumor primario, la mama y cambios patológicos en el pezón y una alta ocurrencia de metástasis de otros órganos, este modelo máximo imita la progresión del cáncer de mama humano. Crecimiento de tumor primario en situ, metástasis a larga distancia y el microambiente tumoral de cáncer de mama pueden ser investigados utilizando este modelo.
Introduction
Cáncer de mama es la principal causa de mortalidad femenina en todo el mundo. Con su incidencia progresivamente creciente, el cáncer de mama se ha convertido en un serio desafío para la salud pública1. Modelos murinos de cáncer son buenos puentes entre los estudios clínicos y preclínicos, y un modelo de buena mímica enfermedad murina aumentará la exactitud de la investigación sobre la enfermedad y la medicina.
El crecimiento del tumor primario inicia el progreso de la enfermedad maligna, metástasis y complicaciones son las principales causas de muerte y pobre vida en pacientes con cáncer la mayoría. Varios modelos murinos se utilizan para imitar la patología del cáncer de mama humano2,3,4. Modelos de xenoinjerto son ampliamente utilizados para el estudio de cáncer para entender los caracteres patológicos y a las drogas de la pantalla para la seguridad y eficacia5,6,7. Se generan ratones transgénicos (GEM) para imitar el cáncer de mama humano dirigiéndose a ciertos oncogenes o tumor supresor genes8. Gema tiene un fondo relativamente simple y uniforme para entender el papel de los genes cancerosos progreso; sin embargo, el ambiente artificial y el fondo se limitan a investigar la patología de la metástasis y terapias9. Las células cancerosas humanas, aunque con rasgos patológicos humanos, pueden solamente ser implantadas en ratones inmune deficiente, y la insuficiencia de la interacción inmune tumor-anfitrión puede conducir a resultados sesgados10.
Donde inicia el tumor sólido tiene una influencia directa en los caracteres biológicos y patológicos de la enfermedad11,12,13. Puesto que se cancerosos progreso es el resultado complejo de las interacciones entre las células tumorales, células estromales, células de Inmunología, células inflamatorias, factores de crecimiento y proteasas, tumores primarios implantados en situ proporcionará mejor comprensión e imitar el proceso canceroso, con mayor precisión que los tumores inducidos por agentes químicos o una inyección subcutánea de tumor células. Agentes químicos utilizados para inducir tumores pueden ser perjudiciales para los investigadores y el medio ambiente y están incluso prohibidos en algunos países. Debido a la ausencia de un entorno de almohadilla de grasa mamaria, puede ser diferente con la evolución patológica de una inyección subcutánea que en pacientes con cáncer de mama real, cuyo cáncer origina e irrita de la almohadilla de grasa mamaria. Las desventajas de las inyecciones subcutáneas estimulan el uso de modelos de orthotopic para el estudio de crecimiento del tumor. En investigaciones anteriores, altamente metastásicos tumores MDA-MB-231, desarrollados después de siete trasplantes ortotópico, indican la importancia de la ubicación de inyección14. Recientemente, la implantación ortotópica de las células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria con cirugía fue reportado15,16. Con el medio ambiente botón mamario, el crecimiento del tumor y la migración hacia órganos distantes cubierta todo el proceso del cáncer de mama en sitios de interés patológico, que hace de este modelo una miniatura de la evolución de las enfermedades humanas. Sin embargo, después de la cirugía, la piel automáticamente trata de curarse a sí mismo, que puede traer el riesgo potencial de interferir con el origen del cáncer de mama normal y sesgar los resultados.
Hemos comparado algunos modelos de cáncer de mama y estableció un modelo ortotópico mínimamente invasivo para investigar el efecto potencial de fármacos en cáncer de mama progresión17,18. En este estudio, un protocolo de vídeo sobre cómo orthotopically inyectar las células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria de manera sencilla, se presenta menos forma invasiva. Este método de inyección de orthotopic sin cirugía es ventajoso en muchos aspectos. En primer lugar, la operación es simple y rápida, aproximadamente 1 minuto por ratón. En segundo lugar, con los focos del tumor primario a partir de los sitios patológicos derecha, abarca el proceso entero tumorigenic de progresión del cáncer de mama desde el crecimiento del tumor a la metástasis de otros órganos, que proporciona un buen modelo animal experimental para el estudio de la interacción de las células tumorales y el microambiente tumoral. Además, puede ser un valioso modelo para estimar los efectos del tratamiento en todas las etapas del cáncer de mama. El objetivo de este método es proporcionar un modelo animal para la progresión del cáncer de mama humano imitan máximo.
Protocol
Representative Results
Discussion
Las células utilizadas en este estudio son 4T1-luc2, murinos triple negativo células cancerosas del pecho con etiqueta de la luciferasa, que son una herramienta útil para invertir efectos antitumorales y antimetastásicas de drogas debido a su naturaleza altamente invasiva2,19 . Luciferasas, estables a la siguiente generación de células, se utilizan para indicar que el tumor de la vida de las células, tanto en la glándula mamaria y en otros órganos distan…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores desean agradecer a la Fundación Nacional de Ciencias naturales de China (grant no. 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), la Fundación de Ciencias naturales Beijing (grant no. 7172095, 7162084, 7162083) y la Fundación de Xia Xu del Hospital de Beijing La medicina tradicional China (subsidio no, xx201701). Agradecemos a Prof. Chang Zhen Liu, del centro de Investigación Experimental, China Academia de ciencias médicas chinas, imágenes bioluminiscentes.
Materials
| anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
| In-Vivo Imaging System | PerkinElmer | IVIS Spectrum | used for bioluminescence detecion |
| isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
| 1 ml syringe | Becton,Dickinson and Company | A257 | cell injection |
| digital caliper | Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd. | S-H | volume measurement |
| tramadol | Mundipharma company | – | pain killer |
| D-luciferin | Gold Biotechnology Inc. | LUCK-1G | used for bioluminescence detecion |
| The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31 | Abcam | ab28364 | used for MVD detection |
| hematoxylin and eosin staining kit | Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. | ZLI-9615 | histology |
| hair removal cream | Veet | – | hair removal cream |
| Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | – | ophthalmic ointment |
| sewing needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 17U0302J | suture |
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