Dos Enfoques Citométricos De Flujo De La Detección De Superficie Del Ligando NKG2D Para Distinguir Las Células Madre De Las Subpoblaciones A Granel En La Leucemia Mieloide Aguda

Henrik Landerer; Marlon Arnone; Ronja Wieboldt; Elsa Goersch; Anna M. Paczulla Stanger; Martina Konantz; Claudia Lengerke

doi:10.3791/61803

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Dos Enfoques Citométricos De Flujo De La Detección De Superficie Del Ligando NKG2D Para Distinguir Las Células Madre De Las Subpoblaciones A Granel En La Leucemia Mieloide Aguda

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DOI:

10.3791/61803

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21 de febrero de 2021

Henrik Landerer^*¹ , Marlon Arnone^*¹ , Ronja Wieboldt² , Elsa Goersch¹ , Anna M. Paczulla Stanger³ , Martina Konantz¹ , Claudia Lengerke¹^,²^,³

¹Department of Biomedicine, University Hospital Basel and University of Basel, ²Division for Hematology, University Hospital Basel and University of Basel, ³Department of Internal Medicine, Hematology and Oncology, University Hospital Tübingen

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Presentamos dos diversos protocolos de coloración para la detección del ligand de NKG2D (NKG2DL) en muestras agudas primarias humanas de la leucemia mieloide (AML). El primer enfoque se basa en una proteína de fusión, capaz de reconocer todos los ligandos conocidos y potencialmente desconocidos, mientras que el segundo protocolo se basa en la adición de múltiples anticuerpos anti-NKG2DL.

Resumen

Dentro del mismo paciente, la ausencia de expresión superficial de los ligands de NKG2D (NKG2DL) fue mostrada para distinguir a subpoblaciones leucémicas con las propiedades de la célula de vástago (llamadas las células madres leucémicas, LSCs) de las células leucémicas de contrapartes más distinguidas que carecen de potencial de la iniciación de la enfermedad aunque lleven mutaciones genéticas específicas similares de la leucemia. NKG2DL son bioquímicamente muy diversas auto-moléculas tipo MHC clase I. Las células sanas en condiciones homeostáticas generalmente no expresan NKG2DL en la superficie celular. En cambio, la expresión de estos ligandos se induce tras la exposición al estrés celular (por ejemplo, transformación oncógena o estímulos infecciosos) para desencadenar la eliminación de las células dañadas a través de la lisis a través de células inmunes que expresan receptores NKG2D, como las células asesinas naturales (NK). Curiosamente, la expresión de la superficie de NKG2DL se suprime selectivamente en las subpoblaciones de LSC, lo que permite a estas células evadir la vigilancia inmune mediada por NKG2D. Aquí, presentamos un análisis de lado a lado de dos diversos métodos cytometry de flujo que permitan la investigación de la expresión superficial de NKG2DL en las células cancerosas es decir, un método que implica el reconocimiento del cacerola-ligand y un método que implica la coloración con los anticuerpos múltiples contra solos ligands. Estos métodos se pueden utilizar para separar las subpoblaciones celulares negativas viables de NKG2DL con supuestas propiedades de células madre cancerosas de NKG2DL positivo no LSC.

Introducción

Las células NK son importantes efectoras del sistema inmune innato que pueden reconocer y eliminar células malignas o células sanas estresadas (por ejemplo, por una infección viral) sin estimulación previa de^{antígenos 1.} Este proceso está estrechamente regulado a través de un complejo repertorio de receptores activadores —como los receptores naturales de citotoxicidad (NCR), NKG2D y CD16— y receptores inhibitorios que están representados en gran medida por receptores asesinos similares a inmunoglobulinas (KIRs)^2. El atascamiento de KIRs a las moléculas humanas de la clase I del antígeno del leucocito (HLA) en las células....