Hibridación de fluorescencia in situ interfásica de frotis de médula ósea de mieloma múltiple

Resumen

Aquí, presentamos un protocolo para mejorar el éxito de la detección de hibridación de fluorescencia in situ interfásica en frotis de médula ósea de pacientes con mieloma múltiple.

Resumen

La detección de hibridación fluorescente in situ (FISH) es un método indispensable en la estratificación del riesgo genético en el mieloma múltiple (MM), que es una de las neoplasias hematológicas malignas más comunes. La característica identificativa de MM son las células plasmáticas malignas acumuladas en la médula ósea. Los informes FISH para MM se centran principalmente en células plasmáticas clonales purificadas o identificadas, en lugar de todas las células nucleadas, mediante la clasificación con perlas magnéticas anti-CD138 o el marcado con cadena ligera de inmunoglobulina citoplasmática κ o λ. Los núcleos de interfase de la médula ósea generalmente se obtienen de células frescas de la médula ósea. Sin embargo, el enriquecimiento satisfactorio de las muestras de células plasmáticas requiere grandes cantidades de médula ósea fresca anticoagulada con heparina, que no se puede obtener en el caso de una extracción difícil de la médula ósea o un grifo seco de médula ósea. Aquí, establecemos un método novedoso para mejorar el éxito de la detección de FISH en frotis de médula ósea teñidos o no manchados. Los frotis de médula ósea son más fáciles de obtener que las muestras de médula ósea anticoaguladas.

Introducción

El mieloma múltiple (MM) es una enfermedad maligna de células plasmáticas (PC) con una fuerte heterogeneidad biológica y grandes diferencias individuales en la eficacia clínica, con períodos de supervivencia que van desde meses hasta décadas. Las características citogenéticas son importantes indicadores pronósticos de la MM. El sistema de estratificación del riesgo y los tratamientos individualizados basados en características genéticas se han convertido en temas de intenso interés en la investigación clínica sobre ^MM1. Las aberraciones de los PC probados en un panel de hibridación fluorescente in situ (FISH) de médula ósea (BM) incluy....

Protocolo

Este estudio se realizó de acuerdo con los principios de la Declaración de Helsinki y fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital Zhongnan de la Universidad de Wuhan (No. 2019065). Los especímenes fueron recolectados de un paciente mm en el Departamento de Hematología del Hospital Zhongnan de la Universidad de Wuhan (China).

1. Preparación de los frotis de BM

1. Coloque los primeros 0,2 ml de solución de BM en un portaobjetos de vidrio desechable limpio.
2. Extienda las manchas de BM a un grosor uniforme con colas afiladas retirando rápidamente el BM. Luego, secar naturalmente.
3. Cubra las películ....

Resultados

En la evaluación morfológica inicial de un paciente MM recién diagnosticado, se encontró que el 15% de los PC en un frotis de BM tenían núcleos más grandes y oscuros junto con mayores cantidades de citoplasma que los PC normales (Figura 2A). El primer tubo de BM anticoagulante de heparina detectado por la técnica del inmunofenotipo reveló solo el 2,3% de los PC aberrantes monoclonales. La clasificación inmunomagnética de perlas CD138 en combinación con FISH o la técnica cIg-FISH es esencial .......

Discusión

La aplicación de FISH a la estratificación del riesgo genético en MM es esencial. La parte crítica de los informes fish no son todas las células nucleadas, sino los PC clonales específicamente purificados o identificados mediante la clasificación con perlas magnéticas anti-CD138 o el marcado con inmunoglobulina citoplasmática de cadena ligera κ o λ. Se encontró que la interfase FISH después de la clasificación de PC o cIg-FISH era significativa en el diagnóstico de MM debido a la proporción relativamente menor de PC en e.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
máquina automática FISH	Leica  Corporación	S500-24	FINAL Conjunto Thermobrite 240V
DAPI	Abbott Molecular Inc.	06J49-001	DAPI Counterstain
FISH Software de análisis	IMSTAR  Corporación	IMSTAR	Software de análisis
FISH Sonda FISH	Abbott Molecular Inc.	05N56-020	Vysis Locus Specificifc Identifer TP53 / CEP 17 FISH Kit de
sonda Pipeta de volumen fijo	Eppendorf China Ltd.	M33768H	10  microlitro
Microscopio de fluorescencia	Olympus Corporation	BX53	Microscopio de fluorescencia directa
Software de análisis de cariotipo	IMSTAR  Corporación	IMSTAR	Software de análisis de biotipo
Microscopio	óptico Olympus  Corporación	BX41	Microscopio de luz delantera
NP-40	Abbott Molecular Inc.	07J05-001	NP-40
Estante de teñido de tinción de plástico	Guangzhou Kaixiu Trading Co., Ltd.	RSJ-501	24 diapositivas
Tanque de teñido de tinción de plástico	Guangzhou Kaixiu Trading Co., Ltd.	RSJ-516	24 correderas
Cemento de caucho	Marabú  GmbH & Co. KG	FixoGum	Cemento de caucho
SSC	Abbott Molecular Inc.	02J10-032	20 veces; Baño
de agua	Shanghai Boxun Medical Bio-Instrument Co., Ltd.	DK-8D	Baño de agua de múltiples temperaturas

SSC