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Artículo de método

Trasplante cardíaco cervical heterotópico de ratón utilizando manguitos vasculares

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DOI:

10.3791/64089

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23 de junio de 2022

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En este artículo

Resumen

Los modelos de trasplante cardíaco de ratón representan valiosas herramientas de investigación para estudiar la inmunología del trasplante. El presente protocolo detalla el trasplante cardíaco cervical heterotópico de ratón que implica la colocación de manguitos en la arteria carótida común del receptor y el tronco de la arteria pulmonar del donante para permitir el flujo sanguíneo laminar.

Resumen

Los modelos murinos de trasplante cardíaco se utilizan con frecuencia para estudiar la lesión por isquemia-reperfusión, las respuestas inmunes innatas y adaptativas después del trasplante y el impacto de las terapias inmunomoduladoras en el rechazo del injerto. El trasplante cardíaco cervical heterotópico en ratones se describió por primera vez en 1991 utilizando anastomosis suturadas y posteriormente se modificó para incluir técnicas de manguito. Esta modificación permitió mejorar las tasas de éxito, y desde entonces, ha habido múltiples informes que han propuesto nuevas mejoras técnicas. Sin embargo, la traducción a una utilización más generalizada sigue siendo limitada debido a la dificultad técnica asociada con las anastomosis del injerto, que requiere precisión para lograr la longitud y el calibre adecuados de los manguitos para evitar la torsión anastomótica vascular o la tensión excesiva, que puede resultar en daño al injerto. El presente protocolo describe una técnica modificada para realizar un trasplante cardíaco cervical heterotópico en ratones que consiste en la colocación del manguito en la arteria carótida común del receptor y la arteria pulmonar del donante en alineación con la dirección del flujo sanguíneo.

Introducción

Abbott et al. publicaron1 la primera descripción del trasplante de corazón abdominal heterotópico en ratas en 1964. Estas técnicas quirúrgicas fueron refinadas y simplificadas por Ono et al. en 19692. Corry et al. describieron por primera vez un método para el trasplante de corazón abdominal heterotópico en ratones en 1973; Similar a los modelos de rata previamente reportados, esto implicó el injerto en el abdomen del huésped con revascularización por anastomosis de extremo a lado de la arteria pulmonar del donante y la aorta ascendente a la vena cava inferior y la aorta abdominal del receptor, respectivamente

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Protocolo

Todos los procedimientos de manejo de animales se llevaron a cabo de conformidad con las pautas de Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio de los NIH y fueron aprobados por el Comité de Estudios Animales de la Facultad de Medicina de la Universidad de Washington. Los corazones de ratones C57BL / 6 (B6) y BALB / c (con un peso de 20-25 g) se trasplantaron en receptores de B6 de la misma calidad (6-8 semanas de edad). Los ratones se obtuvieron de fuentes comerciales (ver Tabla de materiales). Se realizaron trasplantes singénicos para evaluar las respuestas celulares relacionadas con la lesión por isquemia-reperfusión, y trasplantes alogénicos para inve....

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Resultados

Este modelo de trasplante cardíaco heterotópico cervical de ratón se ha utilizado para realizar más de 1.000 trasplantes en nuestro laboratorio, con una tasa de supervivencia de aproximadamente el 97%. La tasa de éxito es ligeramente superior a los informes anteriores utilizando otras técnicas de trasplante cardíaco heterotópico cervical en ratones10,11,20. Esto podría atribuirse potencialmente al manguito más grande de 20 G col.......

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Discusión

Utilizando esta técnica, el trasplante cardíaco cervical heterotópico de ratón puede ser realizado en menos de 40 minutos por un microcirujano experimentado y en aproximadamente 60 minutos por un microcirujano de nivel básico. Mientras que el trasplante de corazón cervical ha sido estudiado en numerosos modelos animales, un modelo de ratón sigue siendo el estándar de oro debido a múltiples cepas genéticas bien definidas, capacidades de alteración genética y la disponibilidad de numerosos reactivos, incluyendo anticuerpos.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

DK cuenta con el apoyo de las subvenciones de los Institutos Nacionales de Salud 1P01AI116501, R01HL094601, R01HL151078, la subvención de revisión de mérito de la Administración de Veteranos 1I01BX002730 y la Fundación para el Hospital Barnes-Judy.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Corbatas de seda trenzadas 6-0Henry Schein Inc7718729
0.75% Providone iosina exfoliantePriority Care IncNDC 57319-327-0
10-0 sutura de nailonSurgical Specialties CorporationAK-0106
Q-dots no dirigidos de 655 nmInvitrogenQ21021MP
70% EtanolPharmco Products Inc111000140
8-0 lazos de seda trenzadosHenry Schein Inc1005597
Pinzas AdsonFine Science Tools Inc91127-12
BALB/c y C57BL/6 ratones (6-8 semanas)Jackson Laboratories
Coagulador bipolarValleylab IncSurgII-20, E6008/E6008B
Inyección de carprofeno (Rimadyl)Transpharm35844
Carprofeno (Rimadyl) comprimido masticable oralTranspharm38995/37919
Microscopio 2P hecho a medida con software de adquisición ImageWarpA& B Software
Dumont n.º 5 pinzasFine Science Tools Inc11251-20
Tijeras de resorte estilo vannasfinas Fine Science Tools Inc15000-03
GraphPad Prism 5.0Sun Microsystems Inc.
Portaagujas HalseyFine Science Tools Inc91201-13
Halsted-Mosquito abrazadera punta curvaFine Science Tools Inc91309-12
Harvard Apparatus ventilador de ratón modelo 687Harvard ApparatusMA1 55-0001
Solución de heparina (100 U/mL)Abraxis Productos farmacéuticos504031
ImarisBitplane
Ketamina (50 mg/kg)Wyeth206205-01
Microscopio— Leica Wild M651 y tiempos; 6– 40 aumentosLeica Microsystems
Tijeras de resorte extra finas MoriaFine Science Tools Inc15396-00
Ohio vaporizador de isofluranoParkland ScientificV3000i
QdotsThermoFisher1604036
S& Pinzas T SuperGrip con punta angularFine Science Tools Inc00649-11
S& Pinzas T SuperGrip de punta rectaFine Science Tools Inc00632-11
Solución salina normal estéril (0,9% (peso/vol) cloruro de sodioHospira IncNDC 0409-4888-20
Hisopos estériles (mini aplicadores cónicos de 3 pulgadas con punta de algodón)Puritan Medical Company LLC823-WC
Surflow 20 calibre 1/4 de pulgada Angiocatéter de teflónTerumo Medical CorporationSR-OX2032CA
Angiocatéter de teflón de 3/4 pulgadas de calibre SurflowTerumo Medical CorporationR-OX2419CA
ThermoCare (ajustes de recuperación 3 L/min O2, 80 ° C, 40% de humedad)Thermocare Inc
VetBondSanta Cruz BiotechnologySC361931 NC0846393
Xilacina (10 mg/kg)Lloyd Laboratories139-236
Sistema de UCI para animales pequeños

Referencias

  1. Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. A technique for heart transplantation in the rat. The Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).
  2. Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. The Journal of Thoracic and Card....

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Reimpresiones y permisos

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