Extracción de veneno de la avispa parasitoide Trichogramma dendrolimi utilizando un huésped artificial

Resumen

Aquí, presentamos un protocolo para extraer veneno de Trichogramma dendrolimi utilizando un huésped artificial creado con una película de polietileno y una solución de aminoácidos.

Resumen

Las avispas parasitoides son un grupo diverso de insectos himenópteros que sirven como recursos invaluables para el control biológico de plagas. Para garantizar el éxito del parasitismo, las avispas parasitoides inyectan veneno en sus huéspedes para suprimir la inmunidad de sus huéspedes, modular el desarrollo, el metabolismo e incluso el comportamiento de los huéspedes. Con más de 600.000 especies estimadas, la diversidad de avispas parasitoides supera a la de otros animales venenosos, como serpientes, caracoles cono y arañas. El veneno de avispa parasitoide es una fuente poco explorada de moléculas bioactivas con aplicaciones potenciales en el control de plagas y la medicina. Sin embargo, la recolección de veneno parasitoide es un desafío debido a la incapacidad de usar estimulación directa o eléctrica y la dificultad en la disección debido a su pequeño tamaño. Trichogramma es un género de avispas parasitoides de huevo diminutas (~0,5 mm) que se utilizan ampliamente para el control biológico de plagas de lepidópteros tanto en la agricultura como en los bosques. Aquí, reportamos un método para extraer veneno de T. dendrolimi usando huéspedes artificiales. Estos huéspedes artificiales se crean con una película de polietileno y soluciones de aminoácidos y luego se inoculan con avispas Trichogramma para el parasitismo. Posteriormente, el veneno fue recogido y concentrado. Este método permite la extracción de grandes cantidades de veneno de Trichogramma al tiempo que evita la contaminación de otros tejidos causada por la disección, un problema común en los protocolos de disección de reservorios de veneno. Este enfoque innovador facilita el estudio del veneno de Trichogramma , allanando el camino para nuevas investigaciones y posibles aplicaciones.

Introducción

Las avispas parasitoides son insectos himenópteros parásitos que son recursos importantes para el control biológico¹. Existe una gran variedad de avispas parasitoides, con más de 600.000 especies estimadas². La diversidad de avispas parasitoides supera con creces la de otros artrópodos venenosos, como serpientes, caracoles cono, arañas, escorpiones y abejas. El veneno es un factor parasitario importante en las avispas parasitoides. Para un parasitismo exitoso, el veneno se inyecta en el huésped, modulando el comportamiento, la inmunidad, el desarrollo y el metabolismo del^huésped. Además, el veneno....

Protocolo

1. Cría de insectos

1. Alimente Corcyra cephalonica con harina de maíz a una temperatura de 26 ± 1 °C y una humedad relativa del 40% ± 10%.
2. Cría una cepa de T. dendrolimi del insectario Jilin en interiores utilizando los huevos de Corcyra cephalonica como huéspedes. Alimente a los adultos de avispa al 10% con agua de sacarosa en tubos de Drosophila a una temperatura de 26 ± 1 °C, humedad relativa del 70% ± 10%, luz (L): oscuridad (D) período de 14 h: 10 h.

2. Preparación de tarjetas de huevo de película plástica de polietileno

1. Tom....

Resultados

La concentración de proteínas de las muestras representativas de veneno se midió utilizando el kit de ensayo de proteínas, con los resultados presentados en la Tabla 1. Los resultados mostraron que la concentración de proteína de veneno recolectada por este método varió de 0,35 μg/μL a 0,46 μg/μL, mientras que el control negativo de la solución de aminoácidos solo tuvo una concentración de proteína de 0,03 μg/μL a 0,05 μg/μL. La concentración de proteína de veneno recolectada por este método es mucho may.......

Discusión

Aquí, presentamos un método para extraer veneno de T. dendrolimi utilizando huéspedes artificiales. Los puntos clave en el experimento de recolección de veneno son los siguientes. (1) Durante la preparación, T. dendrolimi debe anestesiarse rápidamente con una concentración adecuada de CO₂. Si la concentración de_CO2 es demasiado baja, será insuficiente para anestesiar el Trichogramma rápidamente. Por el contrario, si la concentración es demasiado alta, Trichogramma.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
10 μ m Red de nailon	Millipore NY1002500		Para filtrar los huevos
10% Alcohol polivinílico	Aladdin	P139533	Para atraer  T. dendrolimi  para poner huevos
10% Sacarosa agua	Sinopharm Reactivo Químico	10021463	Alimentar Trichogramma dendrolimi
4x tampón de carga LDS	Ace Hardware	B23010301	SDS-PAGE Caja de
recogida	Deli	8555	Contenedor para T. dendrolimi parasitism
Future PAGE  4– 12% (12 pocillos)	Ace Hardware	J70236502X	SDS-PAGE
GenScript eStain L1 aparato de tinción de proteínas	GenScript	L00753	SDS-PAGE
Varilla de molienda de vidrio	Applygen	tb6268	Protuberancias semicirculares
L- Leucina	Solarbio	L0011	Componentes artificiales del huésped
L-Histidina	Aladdina	A2219458	Componentes artificiales
del huésped L-fenilalanina	Solarbio	P0010	Componentes del huésped artificial
Minicentrífugas	Scilogex	D1008	Centrífuga
MOPS-SDS tampón de funcionamiento Ace	Hardware	B23021	SDS-PAGE
Kit de ensayo de proteínas BCA Omni-Easy Instant	Shanghai Yamay Biomedical Technology	ZJ102	Para la esimación de la concentración de proteínas del veneno
disposición de la placa PCR de 96 orificios	Thermo Fisher	AB1400L	Protuberancias semicirculares
Película plástica de polietileno	Suzhou Aopang Trading	001c5427	Tarjeta de huevo artificial
Marcador de proteína de color preteñido (10– 180 kDa)	YiFeiXue Biotech	YWB007	SDS-PAGE
Banda elástica	Guangzhou qianrui biología ciencia y tecnología	009	Apriete la película de plástico y la caja de recolección
Estera de septos de caucho de silicona, 96 pocillos, orificio redondo	Sangon Biotech	F504416-0001	Protuberancias semicirculares

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