Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:22 min. • July 8th, 2025
Tome una mezcla de un ARN CRISPR, o ARNcr, y un ARNcr o ARNcr transactivador.
Calentar la mezcla y dejar que se enfríe, facilitando el emparejamiento de bases del tracrRNA con el crRNA para formar un ARN guía o gRNA.
Agregue tijeras moleculares llamadas enzimas Cas9 que se unen al ARNg, creando complejos.
Agregue los complejos Cas9-gRNA a las células Natural Killer o NK suspendidas en una solución de electroporación.
Introducir moléculas de ADN monocatenario que ayudan a transportar complejos Cas9-gRNA.
Transfiera la mezcla a una cubeta y realice la electroporación, creando poros temporales en la membrana para que los complejos ingresen a la célula.
El ARNg se une al sitio objetivo en el genoma, lo que permite que Cas9 escinda el ADN.
Las proteínas de reparación se unen en el sitio de ruptura y se unen al ADN, lo que a menudo causa errores de inserción o eliminación de pares de bases. La modificación resultante interrumpe el gen diana, haciéndolo no funcional.
Transfiera las células modificadas genéticamente a un medio adecuado para su posterior análisis.
El día de la electroporación, llene un matraz T25 con 8 mililitros de medio de cultivo fresco suplementado con 100 UI por milili
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