Name: בשנת הזרקה תוך חדרי ברחם ו electroporation של E16 עוברים עכברוש (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 4 s
Description: למדו הזרקה תוך חדרית ואלקטרופורציה בעוברי עכברוש ביום עוברי 16 לחקר מניפולציות גנטיות במערכת העצבים המתפתחת. שיטה זו מאפשרת מחקר מתקדם בביולוגיה התפתחותית ובנוירומדעים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

בשנת הזרקה תוך חדרי ברחם ו electroporation של e16 עוברים עכברוש

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

ברחם-in-vivo הזרקת electroporation של הניאוקורטקס עכברוש עובריים מספק כלי רב עוצמה עבור מניפולציה של אבות בודדים לאורך הקירות של החדר לרוחב. טכניקה זו היא כעת בשימוש נרחב כדי לחקור את התהליכים המעורבים corticogenesis על ידי יתר להביע או דריסה גנים התבוננות על תופעות התפשטות ההגירה הסלולר, והבחנה. בהשוואה אסטרטגיות בנוקאאוט המסורתית, ב-ברחם electroporation מספק אמצעי מהיר כדי לתפעל אוכלוסייה של תאים במהלך חלון הזמני ספציפיים. בפרוטוקול זה וידאו, אנחנו המתאר את המתודולוגיה ניסיוני להכנת חולדות לניתוח, לחשוף את הקרניים דרך הרחם laporatomy, הזרקת DNA לתוך החדרים רוחבי של העובר המתפתח, electroporating דנ&quot;א לתוך אבות המצפים את הקיר לרוחב, וטיפול בבעלי חיים שלאחר הניתוח. המעבדה שלנו משתמשת בפרוטוקול זה על ניתוחים על E15-E21 חולדות, אולם זה מבוצע לרוב על E16 כפי שמוצג בסרטון זה.

בשנת הזרקה תוך חדרי ברחם ו electroporation של E16 עוברים עכברוש

הזרקה ואלקטרופורציה בשיטת in-vivo בתוך הרחם (in-utero) של הנאוקורטקס העוברי של חולדה מספקות כלי רב-עוצמה למניפולציה של תאי אב בודדים...

שלום, שמי וויליאם טי. אני ממעבדה של סטיין בארנולד קריק. היום, אני ואחרים נדגים לכם הזרקה תוך-רחמית לעוברים של חולדה ביום העובר E 16. שלום, שמי לורה אליאס.היום אראה לכם כיצד להכין את פיפטות המיקרו-הזרקה ולמלא אותן לצורך ההזרקות תוך-חדריות והאלקטרפורציה שנבצע היום. כמו כן, אדגים כיצד לבצע את ההזרקות תוך-החדריות ואת האלקטרפורציה בעוברים של חולדה בשלב E 16. הזרקות ואלקטרפורציה תוך-רחמיות בחולדה הן שימושיות במיוחד מכיוון שהחולדה היא מערכת שבה לא ניתן לבצע מניפולציות גנטיות בקלות.בשלב זה, אנו משתמשים במספר כלי ניתוח לצורך הפרוצדורה. אנו משתמשים במקבץ (freer), במספר פינצטות הרמה (addin forceps) – זוג אחד משונן וזוג נוסף עם שן קטנה בקצה – ובזוג המוסטטים (hemostats).אלו הם מספריים, ולאחר מכן אנו משתמשים בשני השדכנים הללו. זהו השדכן הגדול יותר שבו אנו משתמשים עבור חולדות. זהו השדכן הקטן יותר שבו אנו משתמשים עבור עכברים, הוא משתמש בסיכה בגודל 7, והשני משתמש בסיכה בגודל 9, ושניהם פועלים באמצעות קפיץ.כמה מהכלים שבהם אנו משתמשים כאן כדי לסייע בניתוחים הם מקור אור סיב אופטי פשוט עם ראש כפול. אנו משתמשים בפד מחומם שזורם בו מים חמים כדי לשמור על חום. עבור משטח העבודה, אנו משתמשים במערכת אלקטרופורציה זו המיוצרת על ידי BTX.יש לנו מספר גדלים שונים של משטחי תמיכה (paddles) שבהם אנו משתמשים בהתאם לגודל

in-utero-intraventricular-injection-electroporation-e16-rat

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בשנת הזרקה תוך חדרי ברחם ו electroporation E15 של עוברי עכברים

ב electroporation ברחם היא שיטה ערך עבור transfecting ובתאים עצביים in vivo. בהתאם למיקום של אלקטרודות ואת timepoint ההתפתחותי של electroporation, תת מסוימים של תאים בקליפת המוח יכול להיות ממוקד. התאים הממוקדים אז יכול להיות מנותח in vivo או במבחנה על ההשפעות של שינוי גנטי.

ברחם electroporation ואחריו תרבות עצבית ראשונית ללימוד פונקציה ג&#39;ין בתת קבוצה של נוירונים קליפתיים

ב electroporation ברחם מאפשר למסירה גן מהירה באופן מרחבית, ובזמן שבשליטת במערכת לפתח את העצבים המרכזית (CNS). כאן אנו מתארים וישימה מאוד בפרוטוקול electroporation ברחם, שניתן להשתמש בהם כדי לספק בונה ביטוי עובריים לתוך מערכת העצבים המרכזית מספר תחומים, כולל diencephalon telencephalon, ואת הרשתית.

ג&#39;ין אספקה ​​יעילה לתוך השטחים CNS מרובים באמצעות בתוך הרחם Electroporation

ב electroporation חוץ גופית של השפה Rhombic התחתון של עוברי עכברים Midgestation

שליטה על ההתפשטות של תאי גזע הסומטיים היא גורם מרכזי פוגעות המחקר והשימוש בטיפול שלהם. כאן אנו מתארים מערכת באופן זמני להרחבת שליטה עצבית גזע תאים במהלך ההתפתחות ובגרות, אשר ניתן להשתמש כדי להגדיל את מספר הנוירונים שנוצרו במוח העכבר.

התרחבות של תאי גזע עצביים עובריים ומבוגרים על ידי<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation או הזרקת Stereotaxic ויראלי

מקור: קוזה, פ., ואח׳ יצירת חולדות טרנסגניות באמצעות גישת וקטור לנטי-ויראלי. J. Vis. Exp. (2020)סרטון זה מדגים החדרה של וקטורים לנטיביריאליים לעוברים מופריים של חולדה באמצעות מיקרו-הזרקה, על מנת להשיג אינטגרציה יציבה של טרנסגן ליצירת חולדות טרנסגניות.

טרנסדוקציה של עוברים מופריים של חולדה מבוססת וקטור לנטי-ויראלי

סרטון זה מדגים את העברת הדנ"א של פלסמיד לתאי עצב צרבלריים של עוברי מורין באמצעות אלקטרופורציה ברחם. שיטה זו שימושית כדי להשיג הבנה של תפקוד in vivo של גנים בהתפתחות מוחית תקינה והשינויים בביטוי גנים של תאי נוירון במהלך התקדמות הגידול.

In utero Electroporation Based Gene Delivery: טכניקה להזרקת DNA פלסמיד לתאי המוח הקטן העובריים של עוברי מורין

ניתן להשפיע על גנים בזמן ההתפתחות של קליפת המוח או ההיפוקמפוס של החולדות באמצעות electroporation ברחם (IUE) בE16, כדי לאפשר שינויים מהירים וממוקד בקישוריות עצבית למחקרים מאוחרים יותר של התנהגות או neuropathology בבעלי חיים מבוגרים. אחרי לידה בתחום ההדמיה vivo על שליטה בהצלחת IUE מתבצעת על ידי פליטת אור של הפעלת לוציפראז transfected השותף.

דור של חולדות למריחה מהונדסים על ידי<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation ו<em&gt; בvivo</em&gt; הקרנת פליטת אור

פרוטוקול זה מתאר בפירוט כיצד להעביר באופן ספציפי אזורים שונים במערכת העצבים המרכזית C57BL/6 באמצעות אלקטרופורציה ברחם. פרוטוקול זה כולל הוראות מפורטות לטרנספקציות של אזורים המתפתחים לקליפת המוח, ההיפוקמפוס, התלמוס, ההיפותלמוס, גרעין המחיצה הצדדית והסטריאטום.

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, רוחב מחיצת גרעין, וסטריאטום ספציפי<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation בC57BL / 6 העכבר

Periventricular קשרי הטרוטופיה (PNH) היא הצורה הנפוצה ביותר של מום ההתפתחות בקליפת המוח (MCD) בבגרות אבל את הבסיס הגנטי שלה אינו ידוע במקרים ספורדיים ביותר. לאחרונה פיתחנו אסטרטגיה לזיהוי גנים מועמדים חדשניים עבור MCDs וכדי לאשר ישירות שלהם תפקיד סיבתי בתוך vivo.

אסטרטגיה רומן המשלב מערך-CGH, רצף שלם-exome and בתוך הרחם אלקטרופורציה בחולדות לזיהוי גנים סיבתי של מומים המוח

למדו הזרקה תוך חדרית ואלקטרופורציה בעוברי עכברוש ביום עוברי 16 לחקר מניפולציות גנטיות במערכת העצבים המתפתחת. שיטה זו מאפשרת מחקר מתקדם בביולוגיה התפתחותית ובנוירומדעים.

בשנת הזרקה תוך חדרי ברחם ו electroporation של E16 עוברים עכברוש

גלה סרטונים נוספים