Name: En la inyección intraventricular Utero y electroporación de embriones de rata E16 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 4 s
Description: Aprende la inyección intraventricular in utero y electroporación en embriones de rata E16 para manipulación genética. Este método facilita estudios avanzados de neurociencia del desarrollo en modelos de roedores.

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en la inyección intraventricular utero y electroporación de embriones de rata e16

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

En el útero in-vivo de la inyección y la electroporación de la corteza cerebral de ratas embrionarias proporciona una poderosa herramienta para la manipulación de los progenitores individuales que cubren las paredes del ventrículo lateral. Esta técnica es ampliamente utilizada para estudiar los procesos involucrados en corticogenesis por la sobre-expresión o derribar los genes y observar los efectos sobre la proliferación celular, la migración y la diferenciación. En comparación con las estrategias tradicionales de octavos de final, en el útero de la electroporación proporciona un medio rápido para manipular a una población de células durante una ventana temporal específica. En este protocolo de vídeo, se describe la metodología experimental para la preparación de las ratas de la cirugía, la exposición de los cuernos uterinos a través de laporatomy, la inyección de ADN en los ventrículos laterales del embrión en desarrollo, electroporating ADN en los progenitores que recubre la pared lateral, y el cuidado de los animales post- la cirugía. Nuestro laboratorio utiliza este protocolo para las cirugías de E15-E21 ratas, sin embargo, se realiza con mayor frecuencia en E16, como se muestra en este video.

En la inyección intraventricular Utero y electroporación de embriones de rata E16

La inyección in vivo in utero y la electroporación del neocórtex embrionario de rata proporcionan una herramienta potente para la manipulación de progenitores individuales...

Hola, mi nombre es William Ti. Soy del laboratorio Arnold Creek Stein. Hoy, yo y otros vamos a mostrarles la inyección intrauterina de embriones de rata E 16. Hola, mi nombre es Laura Elias.Hoy les mostraré cómo preparar las pipetas de microinyección y cargarlas para las inyecciones intraventriculares y la electroporación que realizaremos hoy. También les mostraré cómo realizar las inyecciones intraventriculares y la electroporación en embriones de rata E16. Las inyecciones y la electroporación in utero son particularmente útiles en la rata, ya que es un sistema en el que no se pueden realizar fácilmente manipulaciones genéticas.Vale, existen varias herramientas quirúrgicas que utilizamos para este procedimiento. Utilizamos un separador, un par de fórceps de Adson, uno con estrías y otro par con un pequeño diente en la punta. También utilizamos un par de hemostatos.Este es un par de tijeras, y luego utilizamos estas dos grapadoras. Esta es la más grande, que usamos para ratas. Esta es la más pequeña, que usamos para ratones, utiliza una grapa tamaño siete, y esta otra utiliza una grapa tamaño nueve, y ambas están simplemente accionadas por resorte.Algunas de las cosas que utilizamo

in-utero-intraventricular-injection-electroporation-e16-rat

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

En la inyección intraventricular Utero y electroporación de embriones de ratón E15

En la electroporación in utero es un método valioso para la transfección de células progenitoras neuronales in vivo. Dependiendo de la colocación de los electrodos y el punto de tiempo en el desarrollo de la electroporación, ciertos subconjuntos de células corticales pueden ser atacadas. Células afectadas puede ser analizada en vivo o in vitro para los efectos de la alteración genética.

En el útero de electroporación seguido por cultivos neuronales primarias para estudiar la función génica en el subconjunto de neuronas corticales

En el útero de la electroporación permite la entrega rápida de genes en un espacio-temporal y controlado de manera en el desarrollo del sistema nervioso central (SNC). Aquí se describe una muy adaptable en el protocolo de electroporación in utero que puede ser utilizado para entregar las construcciones de expresión en múltiples dominios del SNC embrionario, incluyendo el telencéfalo, diencéfalo y la retina.

Entrega génica eficaz en los territorios del SNC múltiples utilizando In Utero La electroporación

Este estudio describe el desarrollo de...

En electroporación in vitro del labio inferior rómbico mitad de la gestación de embriones de ratón

El control de la expansión de células madre somáticas es un factor importante que impide su estudio y uso en terapia. Aquí se describe un sistema para controlar temporalmente madre neural expansión células durante el desarrollo y la edad adulta, que se puede utilizar para aumentar el número de neuronas generadas en el cerebro de ratón.

La expansión de las células madre embrionarias y adultas neurales por<em&gt; In Utero</em&gt; La electroporación o inyección estereotáxica Viral

Fuente: Koza, P., et al. Generación de Ratones Transgénicos utilizando un Enfoque con Vector Lentiviral. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra la administración asistida por microinyección de vectores lentivirales en embriones de rata fertilizados para lograr la integración estable de transgenes en la generación de ratas transgénicas.

Transducción de embriones fertilizados de rata mediante vectores lentivirales

Este video demuestra la entrega de ADN plasmídico en células neuronales cerebelosas de embriones murinos utilizando electroporación en el útero. Este método es útil para comprender la función in vivo de los genes en el desarrollo normal del cerebro y los cambios en la expresión génica de las células neuronales durante la progresión tumoral.

Entrega de genes basada en electroporación en el útero: una técnica para inyectar ADN plasmídico en células cerebelosas embrionarias de embriones murinos

Los genes pueden ser manipulados durante el desarrollo de la corteza o el hipocampo de la rata en el útero a través de electroporación (IUE) en el E16, para permitir modificaciones rápidas y focalizadas en la conectividad neuronal para estudios posteriores de comportamiento o neuropatología en los animales adultos. Postnatal de imágenes in vivo para el control del éxito IUE se realiza mediante bioluminiscencia de la activación de luciferasa co-transfectadas.

Generación de ratas transgénicas por vía tópica<em&gt; En el útero</em&gt; La electroporación y<em&gt; En vivo</em&gt; Detección bioluminiscencia

Este protocolo describe en detalle cómo transfectar específicamente diferentes regiones en el sistema nervioso central C57BL/6 a través de la electroporación en el útero. En este protocolo se incluyen instrucciones detalladas para las transfecciones de regiones que se desarrollan en la corteza, el hipocampo, el tálamo, el hipotálamo, el núcleo septal lateral y el cuerpo estriado.

Específica Striatum Cortex, hipocampo, Thalamus-, hipotálamo, núcleo-septal lateral y<em&gt; In Utero</em&gt; Electroporación en el ratón C57BL / 6

Heterotopia nodular periventricular (PNH) es la forma más común de malformación del desarrollo cortical (MCD) en la edad adulta, pero su base genética sigue siendo desconocido en los casos más esporádicos. Recientemente hemos desarrollado una estrategia para identificar genes candidatos novela de MCDs y confirmar directamente su papel causativo en vivo.

Una nueva estrategia Array-CGH, secuenciación del exoma todo y electroporación en el útero en roedores para identificar los Genes causales de las malformaciones del cerebro

Aprende la inyección intraventricular in utero y electroporación en embriones de rata E16 para manipulación genética. Este método facilita estudios avanzados de neurociencia del desarrollo en modelos de roedores.

En la inyección intraventricular Utero y electroporación de embriones de rata E16

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